Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
В экспериментах, представленных ниже (Medina et al., 1975), мы сконцентрировали внимание на способности с помощью ЯМР-спектроскопии различать нормальное и патологическое состояния ткани молочной железы, а также определять ее перерождение в опухолевую. Во всех образцах определяли как 7\, так и Г2. В отличие от других работ целью таких исследований было показать, существенно ли отличаются средние значения параметров Тг и Т% различных клеточных популяций, а если это так, то определить возможность использования индивидуальных образцов для определения различий между ними.
Все образцы ткани молочной железы человека были получены из больницы Святого Луки Техасского Медицинского центра в виде
287
свежего биопсийного материала, не подвергавшегося фиксации. Диагноз подтвержден с помощью гистологического исследования. Образцы для ЯМР подбирали с однаковым содержанием жировой ткани и обычно анализировали через 1—4 ч после биопсии. Не было обнаружено какой-либо зависимости величин Тг и Т2 от времени, протекающего с момента биопсии до измерения на ЯМР-спектрометре. Эти данные согласуются с результатами предыдущих исследований. Сразу же после измерений на ЯМР образцы фиксировали в формалине и окрашивали гематоксилином или по Массону.
Гистологические исследования последних 30 образцов были выполнены как на тканях, из которых готовили образцы для ЯМР, так и на уже готовых образцах. Это было обусловлено гетерогенностью ткани молочной железы человека особенно при ее фиброкистозном перерождении. Фиброаденомы распознавались легко, тогда как фиброкистозное перерождение иногда определялось трудно. В наших исследованиях встречалось фиброкистозное перерождение, включая фиброз, апокринную метаплазию, расширение протоков или кист с различной степенью и вариабельностью гиперплазии эпителия протоков. Гиперплазия являлась наиболее важным признаком фиброкистозного перерождения.
Большинство карцином, обнаруженных в наших исследованиях, инфильтрировали протоки железы. При обработке результатов были использованы методы вариационной статистики — тесты Манна — Уайта (непараметрическая статистика), Стьюдента (различия между двумя значениями) и Бартлетта (Х2-критерий сравнения двух значений). Вероятность того, что данный образец относится к аденокарциноме или имеется фиброкистозное перерождение, определялась с помощью метода, детальное описание которого приведено ниже. В результате наших исследований оказалось, что значения Тг и Т2 для аденокарцином молочной железы человека отличаются от таковых для тканей нормальной молочной железы и с фиброкистозным перерождением. Однако различия этих показателей для тканей аденокар-цииомы и фиброаденомы незначительны. Так, значения Тх (М dh ± т, мс) для тканей нормальной молочной железы составляли 682 ± zh 32, фиброкистозного перерождения — 665 ± 51, фиброаденомы — '980 ± 51 и аденокарциномы — 874 ± 28. Средние значения Тг для ткани аденокарцином существенно отличались от таковых как для ткани нормальной молочной железы (р < 0,001), так и для ткани фиброкистозного перерождения (р < 0,001), но мало — для ткани фиброаденом (0,5 < р < 0,10). Эти данные подтверждаются при обработке результатов с использованием Х% критерия Барлетта.
Значения Т2 (М dz тп, мс) для тканей нормальной молочной железы, фиброкистозного перерождения, фиброаденом и аденокарцином составляли 35,5 ± 3,5, 37,0 ± 3,0, 62,5 ± 7,3 и 68,6 ± 2,3 соответственно. Значения Т2 для ткани аденокарциномы статистически отличались от таковых как для ткани нормальной молочной железы (р < 0,001), так и для фиброкистозного перерождения (р < 0,001), но менее существенно — для ткани фиброаденом (р > 0,3). Обработку результатов проводили с использованием 2-критерия Стьюдента
288
и непараметрического {/-критерия Майн — Уайта. Оба способа статистической обработки показали достоверность различий значений Тг и Т2 в совокупности образцов фиброкистозной ткани и аденокарцином. Следует отметить, что разброс данных по величине Т2 при фиброкистозном перерождении ткани выше, чем при аденокарциномах. Полученные результаты хорошо согласуются с данными Goldsmith и сотрудников (1978), изучавших рак молочной железы у людей. С целью определения опухолей с большей точностью, чем только с помощью одного времени релаксации, Goldsmith объединил оба показателя Тг и Т2 в один «показатель малигнизации».
Таким образом, метод ядерного магнитного резонанса можно использовать для выявления рака при массовых осмотрах людей, особенно если применять не разрушающий ткани ЯМР-скеннер, позволяющий исследовать все тело.
9.4. ОСОБЕННОСТИ ПЕРВИЧНЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР НОРМАЛЬНОЙ, ПРЕДОПУХОЛЕВОИ И ОПУХОЛЕВОЙ ТКАНЕЙ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ МЫШЕЙ, ОБНАРУЖЕННЫЕ ПО ВРЕМЕНИ РЕЛАКСАЦИИ ЯМР ВОДЫ
Как упоминалось в других разделах этой главы, время спин-решеточной релаксации Тг и время спин-спиновой релаксации Т2 протонов воды нормальных тканей отличаются от таковых тканей опухолей многих животных и человека. Определить молекулярную основу этих различий в целых тканях сложно в связи с влиянием на эти показатели соединительной ткани, содержания крови и лимфы в сосудах, уровня воды и сигналов водорода из липидов жиров. Установить это влияние и определить, действительно ли различия времени релаксации связаны только с изменением уровня гидратации в клетке, можно только с помощью исследования первичных культур. Так как ранее мы установили, что на основании различий Тг и Т2 можно определить нормальное и предопухолевое состояние ткани молочной железы мышей, а также появление опухолей, было решено проверить справедливость таких выводов на первичных культурах этих тканей. На обогащенных популяциях эпителиальных клеток без чужеродного материала можно провести более четкие сравнительные исследования, чем на целых тканях.
