Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Действительно, термин «зависимость от субстрата» в общем использовался для указания на необходимость прикрепления клетки к стеклянному или пластиковому субстрату и был предпосылкой роста или выживаемости в культуре. Очевидно, что эти материалы неприменимы in vivo. Большинство клеток поддерживает свою жизнеспособность и пролиферативную активность без труда. В солидных тканях клеточные контакты с другими клетками или с биологическими поверхностями, такими, как основные мембраны или кость, способны выполнять это требование. Но в суспензии циркулирующих метастазов возможность для закрепления строго ограничена и может появиться при клеточной агрегации. В некоторых экспериментальных опухолевых системах частота появления метастазов слабо коррелирует как с числом единичных, неагрегированных опухолевых клеток, так и с их общим числом в циркуляторной системе, но сильно — с образованием внутрисосудистых агрегатов опухолевых клеток (Romsdahl et al., 1961; Garcia et alM 1963; Gershon et al., 1967; Kim, 1970; Crile et al., 1971; Salsbury et aL, 1975). Когда единичные опухолевые клетки мышей ДВА были отделены от агрегатов опухолевых клеток, Watanabe (1954) обнаружил, что инокуляция агрегатов новым хозяевам была значительно эффективнее для формирования опухолей, чем единичных клеток. Watanabe предположил, что повы-
32
шенная туморогенность агрегатов может быть обусловлена лучшей выживаемостью опухолевых клеток в агрегатном состоянии. Fidler (1974) продемонстрировал, что метастазы меланомы В-16 мышей быстрее формируются преимущественно из больших гроздьев циркулирующих опухолевых клеток, чем из маленьких гроздьев единичных клеток. При сборе венозного оттока из фибросаркомы Т-241 мышей, имплантированной в бедренную мышцу хозяина, Liotta и соавт. (1976) смогли исследовать связь частоты метастазов и размера циркулирующих агрегатов опухолевых клеток. Было доказано, что частота метастазов — функция размера циркулирующих агрегатов. Тысяча опухолевых клеток в агрегатах по 6—7 клеток в каждом, например, вызывает в 10 раз больше метастазов, чем тысяча неа-грегированных клеток, в то же время тысяча клеток в агрегатах по 10—12 клеток в каждом вызывает в 30 раз больше метастазов. Таким образом, агрегация опухолевых клеток значительно ускоряет успешное циркуляторное метастазирование в некоторых экспериментальных опухолевых системах in vivo.
Тенденция клеток к агрегации в культуре также тесно коррелирует во многих случаях с их метастазирующей способностью in vivo. В серии клеточных линий меланомы В-16 мыши, различающихся метастатической потенцией, более активно метастазирующие линии образовывали агрегаты быстрее и больше, по сравнению с менее активно метастазирующей линией (Nicolson et al., 1977). Метастази-рующая способность линии В-16 тесно коррелировала как со скоростью гомологичной клеточной агрегации, так и со скоростью гетерологичной агрегации с тромбоцитами, лимфоцитами, эндотелиальными клетками легких и другими типами опухолевых клеток (Gasic et al., 1973; Fidler, 1975; Nicolson et al., 1977; Madyastha et al.,
1978).
In vivo циркулирующие опухолевые клетки интенсивно агрегируют как одна с другой, так и с тромбоцитами (Wood, 1958; Gesic et al., 1973; Chew et al., 1976; Ainbrns et al., 1978), лимфоцитами (Fidler, 1975; Chew et al., 1976) и эритроцитами (Chew et al., 1976). Агрегация с тромбоцитами происходит особенно быстро. При карциноме Уокера 100 % инокулированных клеток образуют агрегаты в течение 30 с после их введения в сосудистое русло (Chew et al., 1976). Инокуляция опухолевых и нормальных клеток при условиях, благоприятствующих гетерологичной агрегации, также стимулирует онкогенез. В/в коинокуляция нормальных фибробластов и асцитных клеток фибросаркомы МСА-6 мышей, например, увеличивает частоту экстраваскулярных метастазов до 1500 % (Gasic et al., 1973). Коинокуляция клеток HeLa с фибробластами мышей или человека может уменьшить минимальное количество инокулята, необходимого для образования опухоли, в тысячу раз у безволосых мышей (Stiles et al., 1976). Такое же усиление онкогенеза может быть получено с облученными или фиксированными глютаральдегидом и нормальными жизнеспособными фибробластами (Stiles et al., 1976).
Таким образом, несмотря на частое утверждение, что опухолевые клетки в культуре обладают сниженной способностью прикрепляться
3 5-132?
33
к субстрату, опухолевые клетки in vivo строго зависимы от субстрата. Единичные опухолевые клетки в циркулирующей суспензии обладают высокой смертностью, которую можно снизить только за счет образования приемлемого прикрепления, в частности агрегации с другими циркулирующими клетками. Зависимость опухолевых клеток от субстрата может быть единственным наиболее важным барьером для успешного приживления циркулирующих метастазов.
2.4.4. Методологические трудности
Очевидная КОА клеточной линии может изменяться на несколько порядков в зависимости от критерия, используемого для оценки колониеобразования, состава суспензионного или жидкого геля, его концентрации, времени гелеобразования, размера инокулята, частоты смены культуральной среды, изменений осмотического давления в результате испарения, тина воды, используемой для приготовления растворов. Так как различные клеточные линии по-разному чувствительны к вариациям этих параметров, измеряемые значения КОА могут вводить в заблуждение до тех пор, пока метод не будет оптимизирован для каждой клеточной линии, а затем необходимо строго придерживаться оптимально индивидуализированного метода без вариаций.
