Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Эш Б.Б. -> "Трансформированная клетка" -> 107

Трансформированная клетка - Эш Б.Б.

Эш Б.Б., Билл П.Т., Камерон И.Л. Трансформированная клетка — К.: Наукова думка, 1985. — 384 c.
Скачать (прямая ссылка): transformirovannayakletka1985.djvu
Предыдущая << 1 .. 101 102 103 104 105 106 < 107 > 108 109 110 111 112 113 .. 211 >> Следующая

Тем не менее литература насыщена результатами исследований,; авторы которых в затруднении объяснить, почему их результаты несравнимы с другими результатами, даже когда различия условий культивирования очевидны. Пример важности культуральной среды — результаты экспериментов по колониеобразованию трансформированных делеционными мутантами паповавируса клеток в мягком агаре, гд число трансформированных колоний варьировало л зависимости от различных сред (Bendig, FolkA 1979),
192
6.4.3. Селекция трансформантов
Как описано выше, выбор вируса, клеток и условий культивирования — первоначально важные переменные в селекции трансформанта. Следующая важная переменная — метод(ы), используемый для селекционирования трансформированных клеток из популяции клеток, подверженных воздействию трансформирующего агента. Исключая количественные пробы с очищенным вирусом, демонстрирующие, что одна вирусная частица вызывает единственное трансформированное событие, невозможно определить, что «трансформированные» колонии, развивающиеся в клеточной культуре,— более восприимчивая субпопуляция клеток или возникает из вариантов вируса. Хотя отобранные трансформированные клетки могут содержать вирусную нуклеиновую кислоту и(или) экспрессировать продукты вирусного гена, мало исследований было посвящено «нетрансформантам» в инфицированных культурах на присутствие в них вирусных последовательностей или белков.
Чаще всего как примеры фенотипических различий трансформантов использовались «плоские» ревертанты трансформированных клеток часто с акцентом на молекулярную биологию первоначальных трансформантов и ревертантов. Такие исследования были изящно запланированы и в результате продемонстрировали многочисленность генетических нарушений и перестроек, сопровождающих фенотипические изменения. Клонируемые популяции обычно использовались для сравнения клеток при изоляции родительских клеточных линий и клонов. Однако этим же методом и часто в таких же условиях культивирования отбирали и специфическую ассоциацию генотип — фенотип. Селекция трансформантов может быть результатом различий в кариотипе (Clark, Pateman, 1978), что может найти свое отражение в фенотипе и туморогенности получающихся в результате культивирования клеточных линий. В некоторых системах, селекция колоний, выращенных на агаре с определенными характеристиками, может быть селекцией для клеток, трансформированных различными вирусами или различными штаммами вируса (Graf et al., 1980).
6.4.4. Экспрессия ассоциированных с трансформацией параметров и онкогенез
Становится ясным, что все трансформированные клетки не являются идентичными в отношении экспрессии трансформационно чувствительных параметров. В куриных эмбриональных фиброблас-тах, трансформированных близкородственными штаммами Брайан и Шмидт — Руппина вируса саркомы Рауса (RSV), обнаружены многочисленные морфологические и другие различия (см. Bader, Bader, 1976; Hanafusa, 1977), включая иммунологически различимые белки гена src (Levinson et al., 1978). Несколько дефектных по трансформации (td), температурочувствительных (ts) мутантов RSV различаются их способностью индуцировать в куриных клетках некоторые клеточные проявления трансформации при непермиссивной и полу-
14 5-1329
193
пермиссивпой температурах (Bescer et al., 1977; Friis et al., 1977; Weber, Friis, 1979). Например, клетки, инфицированные td- и ts-мутантами RSV, могут иметь нормальную морфологию и потребление гексозы при рестриктивной температуре, однако продолжают расти с увеличенной скоростью (Calothy, Pessac, 1976). Кроме того, МС 29 (птичий остролейкозный вирус) трансформирует фибробласты, вызывая морфологические изменения, утрату актиновых филаментов, увеличение агглютинабельности лектином и способности расти в мягком агаре на клетках. Однако клетки, трансформированные МС 29, не утрачивают фибронектин, способность к увеличению потребления гексозы, повышению уровня активатора плазминогена и туморогенеза in vivo (Royer-Rokora et al., 1978).
Дальнейшее подтверждение разделимости трансформационночувствительных параметров получено в работе Beug и соавт., (1978). Используя клетки, инфицированные td- и ts-мутантами RSV, они исследовали роль ядра в экспрессии и реверсии параметров трансформации при пермиссивной и непермиссивной температурах. Энук-леированные цитоплазмы обратимо приобретали или теряли свойственную для трансформированного состояния морфологию, микроворсинки и складки, актиновые филаменты и фибронектин во время соответственно повышения или понижения температуры. Энуклеи-рованные цитоплазмы сохраняют исходную (до удаления ядра) скорость транспорта гексозы независимо от последующей температуры инкубации. Таким образом, транспорт гексозы назвали «ядерно-зависимым» параметром! для изменения которого, по-видимому, требуется синтез РНК de novo. Другие параметры обозначены как ядернонезависимые.
Из большого числа исследований, демонстрирующих клеточную трансформацию вирусами, только несколько свойств трансформации анализировались в отдельных экспериментах, а окончательный тест на онкогенную потенцию, т. е. туморогенность, не всегда осуществлялся. Это важно, потому что не все клетки, трансформированные in vitro, имеющие свойства, подобные опухолевым клеткам, являлись туморогенными даже тогда, когда тестировались на туморогенность у сингенных, новорожденных, иммуносупрессированных животных в иммунологически привилегированных местах или у бести-мусных мышей, которые утрачивают клеточно опосредованную иммунную систему. Туморогенность коррелировала с фенотипом трансформированных клеток по независимости роста от субстрата (Freedman, Shin, 1974; Shin et al., 1975), сниженному уровню клеточного поверхностного фибронектина (Chen et al., 1976, 1978; Galimore et al., 1977) и другим фенотипическим характеристикам трансформированных клеток (Barrett et al., 1979; Pollack et al., 1975; Rifkin et al., 1974). Однако, как указывали Poste, Flood (1979), характеристика^) преобладающей трансформации зависит от переменных каждой системы. Таким образом, данные параметры могут быть вспомогательными для определения способности клеток формировать опухоли. В этом плане важно отметить, что клеточные линии предположительно «нормального» фенотипа могут формировать опухоли
Предыдущая << 1 .. 101 102 103 104 105 106 < 107 > 108 109 110 111 112 113 .. 211 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed