Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Аденовирусы, или их ДНК, или фрагменты ДНК ранней области 1 левого конца генома аденовируса могут трансформировать культивируемые клетки. Опухоли у сирийских хомячков могут вызывать только определенные аденовирусы, например аденовирус человека типа 12 (Tooze, 1973). Интересно, что объект исследования большинства работ по молекулярной биологии аденовирусов — 2 и 5 типы аденовируса человека, которые нетуморогенны, но могут трансформировать культивируемые клетки. Хотя с точки зрения онкогенеза это может вносить различия в окончательный анализ генетики
188
трансформации, данные, полученные на моделях указанных вирусов, очевидно, применимы для сравнения с трансформацией, индуцированной онкогенными аденовирусами.
При неопровержимости того, что вирусные мутанты — отличные модели, желательно иметь данные об их интенсивно развивающейся истории и о характеристике. Особенно это необходимо для мутантов, выделенных при химическом мутагенезе, в частности для ts-мутантов. С помощью различных проб, взятых из определенного участка генома, может быть обнаружена локализация основного дефекта. В мутированной ДНК могут присутствовать другие дефекты, не определяемые с помощью проб. Такие дополнительные мутанты бывают минорными, или несущественными, однако влияющими на ин-фекционность и(или) трансформирующую способность вируса. Интересно, что у мутантов, генерированных химическими мутагенами,; некоторые участки мутируются легко, в то время как другие — трудно, если когда-либо мутируются вообще. Способ действия мутагенов в общем выяснен, механизм концентрирования мутагенов в определенных участках — нет. Вирус SV40 — соответствующий пример того. Хотя делеционные мутанты по t-антигену были изолированы, не были получены ts-мутанты по t-антигену с помощью химических мутагенов. И наоборот, ts-мутанты гена А (область Т-антигена) являются обычными.
История многих изолятов РНК-содержащих опухолеродных вирусов особенно важна с момента, когда они формируют стабильные рекомбинанты с высокой частотой и многие вирусы при этом содержат гомологичные последовательности и перекрестно реагирующие антигены, предполагающие эволюционную взаимосвязь (Vogt, 1977; Hanafusa, 1977; Tooze, 1973). Для первоначального изолирования «новых» вирусов использование кокультивирования и спасения дефектных вирусов является сомнительной практикой в отношении получения генетически «чистых» вирусов и (или) селекции субпопуляций вирусов (к примеру, Smith et al., 1979). Интересно, что клетки собаки и норки часто легко поддерживают размножение ретровируса. Еще должно быть выяснено, обеспечивают или нет эти клетки генетическими компонентами (или другими факторами) вирионы или просто некоторой функцией, необходимой для репликации. По отношению к селекции трансформантов ретровируса было показано (Graf et alM 1980), что клетки, трансформированные различными штаммами одного и того же вируса, формируют различные типы колоний в мягком агаре. Не менее серьезны вопросы — лабораторные артефакты вирусов и появление истинно патогенных вирусов, особенно после клонирования сублиний вируса, что может привести к различиям в его патогенности (Manly, Buffett, 1979) и круге хозяев (Yoshikura, Yoshida, 1978).
Генетическая нестабильность может быть неотъемлемым свойством ретровирусов, однако размножение этих вирусов в условиях высокой лабораторной вариабельности уменьшает вероятность того, что вирусы одинакового происхождения, и в действительности делает сомнительной их взаимосвязь с первоначальным изолятом вируса.
189
6.4Л.2. Клетки
Исход инфицирования клетки вирусом во многом зависит от происхождения клетки. Таким образом, выбор клеток чрезвычайно важен при планировании экспериментов по трансформации. Ясно, что ДНК-содержащие опухолеродные вирусы могут взаимодействовать с клетками многими путями, но основная предпосылка трансформации — отсутствие гибели клетки. Когда инфекционный паповавирус или аденовирус попадает в клетку, недавно выделепную из природного хозяина, он, возможно, реплицируется, чтобы образовать инфекционное потомство, и клетка погибнет. В таком случае клетка именуется пермиссивной, а инфекция называется продуктивной или литической. Существуют исключения, и совершенно другой ответ является результатом попадания вируса в клетку видов, чужеродных вирусу. В этом случае репликация либо подавляется полностью, либо может быть неэффективной, и клетка выживает. Эта клетка называется непермиссивной для вируса, а инфекция — непродуктивной или абортивной. Промежуточные этапы репликации могут также встречаться в полупермиссивных клетках. Неопластическая клетка может возникнуть как результат абортивной инфекции. Это может быть вызвано инфицированием непермиссивной клетки полным или дефектным вирусом или инфицированием пермиссивной клетки дефектным вирусом. В большей части исследований по изучению механизмов трансформации ДНК-содержащими опухолеродными вирусами использовались непермиссивные для вируса клетки и непер-миссивные для вируса животные при изучении онкогенеза. Эти исследования, как правило, требуют значительного числа вирионов, инокулированных чужеродным хозяевам. Изучение туморогенеза часто требует инокуляции вирионов новорожденным, иммуносупрес-сированным, иммунодефицитным животным или нормальным животным в иммунологически привилегированные места. Формирование опухолей в этих условиях обычно занимает 4—6 мес и может продлиться год или более. Вероятно, что трансформация in vitro или туморогенез в иепермиссивных системах может быть тесно связаны с этиологической ролью вирусов в природном раке. Вирус-индуцированные естественные опухоли животного (или человека), вероятно, вызваны вирусами, которые реплицируются в пер-миссивных или полупермиссивных клетках их природного хозяина.
