Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Как подробно описали Martin и соавт. (1979а, Ь) и Self и Martin (1979), существуют явные противоречия при определении роли Т-антигена паповавируса в поддержании трансформации с учетом видового происхождения клеток, источника клеток, условий* используемых для первоначальной селекции трансформантов. Клетки BALB/c ЗТЗ, трансформированные мутантами SV40 по Т-антигену, отобранные из разросшихся в мягком агаре фокусов или колоний, были относительно температурочувствительными по трансформированному фенотипу (Kelley et al., 1980). И наоборот,; с помощью селекции трансформантов крысиных фибробластов, инфицированных SV40- или ts-мутантами вируса полиомы по антигену,) были идентифицированы клетки либо с температурочувствительнымл
184
либо с температуроустойчивым фенотипом (Rassoulzadegan et al., 1978а, b; Seif, Cuzin, 1977). Различия множественности инфекции могут рассматриваться для указанных наблюдений (Kelley et al., 1980; Rassoulzadegan, Cuzin, 1980). Однако различия, наблюдаемые в клетках, с учетом видового происхождения, источника, условий культивирования и селекции трансформантов могут объяснить вариабельные результаты. Например, клетки крысы на ранних пассажах не будут отвечать так же, как и клеточная линия BALB/c ЗТЗ мышей, которая выделена из другого вида животных и была в культуре в течение деся илетий. Таким образом, трансформация не является особенностью кинетики только вируса, как предполагали некоторые молекулярные вирусологи, но преимущественно зависит от взаимодействия вирус — клетка в окружении, обеспечиваемом условиями культивирования. Эта идея была подкреплена в дальнейшем результатами изоляции клеток, трансформированных ts-мутантами паповавируса, в которых экспрессия трансформированного фенотипа зависела от клеточного цикла (Okada, Hahura, 1979).
Хотя большинство данных подтверждает роль Т-антигена (ов) в инициации и поддержании трансформированного фенотипа, исследования ревертантных клеток (многие из которых — Т-антиген-по-ложительные), утративших большинство или все признаки трансформации, осложнили такую интерпретацию. Эти исследования показали, что присутствие генома SV40 или продуктов вирусного гена не обязательно должно сопутствовать продолжительной экспрессии трансформированного фенотипа (Steinberg et al., 1979; Toniolo, Ba-siline, 1975).
Steinberg и соавт. (1978) изучили несколько фенотипических вариантов клеток крысы, трансформированных SV40. Было продемонстрировано, что полный вирусный геном может поддерживаться в некоторых линиях без признаков экспрессии, что некоторые линии утрачивают генетическую информацию, ответственную за неспособность их клеток экспрессировать определенные продукты вирусного гена, такие, как Т-антиген. Хотя некоторые ревертантные линии не экспрессируют продукты вирусного гена и, вероятно, возвращаются к какому-либо типу контроля роста, клетки приобретают способность расти как пролонгированные субкультуры in vitro. Относительная роль вируса и хозяина в регуляции роста этих клеток остается неясной.
Очевидно, что продолжительный синтез клеточной ДНК хорошо коррелирует с поддержанием Т-антигена в этих ревертантах (Gurney Е., Gurney Т., 1979; Vogel et al., 1973) идругих клетках (Hiscott, Defendi, 1979). В этом аспекте мы наблюдали, что некоторые Т-анти-ген-отрицательные ревертантные клетки после слияния с пермиссив-ными клетками (Moyer М., Moyer R., 1979) превращаются в Т-антиген-положительные и обнаруживают трансформированный фенотип до синтеза вирусной ДНК. В дополнение, эти гетерокарионы являются туморогенными (Moyer et al., 1979; 1981а).
К сожалению, различия видов использованных клеток, типов клеток* условий культивирования, методов селекции ревертантов
185
и т. д. не позволяют получить абсолютные ответы на относительную роль вируса и клетки в утрате трансформированного фенотипа в ре-вертантных клетках. Возможно, сверхпродукция Т-антигена в некоторых клетках регулирует его синтез и (или) других вирусных белков или белков хозяина.
6.3.2.2. Ретровирусы
Трансформирующие белки ретровирусов представлены в обзоре Stephenson et al., (1978). Эволюционно гены ретровирусов, возможно, произошли от клетки хозяина (Bishop, 1978; Stephenson et al., 1978; Vogt, 1977), в связи с этим они могут сегрегировать у инбредных животных (Cohen, Varmus, 1979). Последовательности гена ретровирусов, связанные с саркомагенной трансформацией, были обозначены src. С тех пор как установлено, что результаты исследования src белков ретровирусов птиц дали одно из лучших обоснований существованию вирус-специфических белков, поддерживающих трансформированное состояние, они рассматриваются более детально. При изучении фибробластов птицы, трансформированных птичьими саркоматозными вирусами (ASV), продолжительная экспрессия src — единственного гена опухолеродного вируса 1 необходима для установления и поддержания трансформированного состояния (см. обзор Hanafusa, 1977; Stephenson et al., 1978; Vogt, 1972). Ген кодирует синтез белка с мол. м. 60 кД (Brugge, Erikson, 1977) — протеин-киназы (Collett, Erikson, 1978), являющегося фосфопротеином (Levinson et al., 1978). Белок, имеющий мол. м. 60 кД, который представляли в системе трансляции in vitro Purchio и соавт. (1977), подобен, если не идентичен, белку 60 кД трансформированных ASV клеток курицы и опухолевых клеток хомячка, индуцированных ASV, что показано с помощью иммунопреципитации с сывороткой, полученной от кроликов-опухоленосителей (Brugge, Erikson, 1977). Хотя были описаны (Purchio et al., 1977) и белковые продукты гена src с меньшей молекулярной массой, способные возникать в результате посттрансляционного расщепления.
