Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
180
человека и других приматов, получено в результате исследований, показывающих реактивацию облученного вируса (Jeeves, Rainbow,
1979) и увеличение синтеза ДНК в клетках, обработанных поврежденной ДНК (Moyer, неопубликованные наблюдения).
Последовательности вирусной ДНК, как ДНК-, так и РНК-содержащих опухолеродных вирусов, обычно ковалентно интегрированы в ДНК трансформированных клеток. Исключением могут быть герпесвирусы, чья ДНК может персистировать экстрахромосо-мально (Doerfler, 1975, 1977; Luria et aL, 1978; Карр, Westmoreland, 1976; Tooze, 1973). Интеграция может быть средством «фиксирования» вирусного генома, однако наличие неинтегрированной вирусной ДНК поддерживается во многих трансформированных клеточных линиях.
Многочисленные методики использовались для того, чтобы продемонстрировать ассоциацию вирусной и клеточной ДНК (см. обзоры Doerfler, 1975, 1977). В настоящее время существуют два наиболее широко используемых метода гибридизации нуклеиновых кислот для определения последовательностей вирусных и других ДНК: кинетика реассоциации ДНК (Gelb et al., 1971) и блот-гиб-ридизация по Sauthern (1975) в модификации Botchan и соавт. (1976) и др. (например, Sutter et al., 1978). Такие данные по гибридизации in situ (Kucherlapati et al., 1978) указывают на то, что интеграция ДНК опухолеродных вирусов не сравнима с сайт-специфической интеграцией лизогенных бактериофагов, таких, как X (см. обзор Nash, 1977). ДНК вирусов эукариотов интегрирует во множественные случайные места (см. Botehan et al., 1976; Collins et al., 1980, и указатель литературы здесь; см. также Sutter et al., 1978), хотя некоторые исследования указывают на специфические места хромосом для интеграции (дискутируется в работе Kucherlapati et al., 1978). Однако, если предположить, что случайная интеграция напоминает интеграцию бактериофага \х, следует быть осторожным при проведении подобных аналогий. Такой бактериофаг, который действует подобно транспозону и передвигается из одной области генома в другую (Bukhari, 1976), должен быть изолирован свободным от клеточной ДНК и многих других видов ДНК хозяина. Это позволило предположить, что вырезание вирусного генома не является точным. Вирусы эукариотов могут также приобретать клеточную ДНК хозяина при продуктивной инфекции (см. McCutchan, 1979, и указатель литературы здесь) или вырезании из интегрированного состояния (см. Botchan et al., 1979, 1980, и ссылки здесь). Однако этот случай, подобный случаю с [х-фагом, не является единственным. При нормальных условиях размножения вируса и бляшкоочищения клеточная ДНК хозяина не инкорпорируется в вирусную ДНК эукариотов. В дополнение, ДНК вирусов дикого типа может часто вырезаться из трансформированных клеток интактной, хотя это не всегда наблюдается (см. раздел V).
6*3.2. Трансформирующий ген (ы)
Механизм трансформации является необходимым условием для специфических вирусных генов и продолжающегося синтеза вирус-специфического продукта (ов) (например, трансформирующего белка), который инициировал и поддерживал бы трансформированный фенотип клетки. «Трансформирующие белки» могут оказывать прямое действие в одном или большем числе участков клетки или осуществлять непрямой, но воспроизводимый эффект (ы), инициирующий каскад характерных для трансформации событий, вызывая в конечном итоге их экспрессию. Например, нарушения мембраны, обусловленные мембраноассоциированными вирусными белками, могут иметь доминирующий эффект, приводящий в результате к трансформации клетки. Об этом свидетельствуют обнаруженные в ассоциации с клеточными мембранами «трансформирующие белки» РНК- и ДНК-содержащих опухолеродных вирусов (Anderson et al., 1977; Ito, 1979; Lin et al., 1977; Nicolson, 1976; Shiroki et al., 1979a; Willingham et al., 1979). Как прежде обсуждали (Moyer et al., 1979), способность этих мембраноассоциированных вирусных белков связываться с нуклеиновыми кислотами ускоряет трансформацию и (или) туморогенез. Это находится в противоречии с известной ролью этих белков как опухолевых вирус-специфических трансплантационных антигенов (Nicolson, 1976; Tooze, 1973).
Доказательство вовлечения специфических вирусных генов или генного продукта(ов) в трансформацию получено с помощью множества методических подходов, включая температурочувствительные (ts) мутанты, экспрессирующие трансформированный фенотип при пермиссивной температуре, но кажущиеся нетрансформирован-ными при непермиссивной температуре; делеционные мутанты, утрачивающие определенные участки генома; субгеномные фрагменты вирусной ДНК, содержащие известные генные последовательности; трансляцию in vitro определенных участков генома; микроинъекцию продуктов вирусного гена.
6.3.2.L ДНК-содержащие опухолеродные вирусы
Результаты применения этих методов к двум наиболее интенсивно изученным группам вирусов (аденовирусам и паповавирусам) указывают на то, что только ранние гены или их продукты необходимы для инициации и(или) поддержания трансформации. Невозможно детально описать все поддерживающие этот вывод данные, обсуждающиеся в многочисленных обзорах по опухолевой и молекулярной биологии этих вирусов (Fareed, Davoli, 1977; Flint, 1977; Ginsberg, 1979; Ginsberg, Gyoung, 1979; Graham, 1977; Kelly, Nathans, 1979; Tooze, 1973). В большинстве случаев авторы утверждают, что ранние (но не поздние) продукты генов экспрессированы в трансформированных и опухолевых клетках.
