Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Энгельгард Х. -> "Руководство по капилярному электрофорезу" -> 97

Руководство по капилярному электрофорезу - Энгельгард Х.

Энгельгард Х. Руководство по капилярному электрофорезу — Москва, 1996. — 112 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvopokapilyaram1996.pdf
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 130 >> Следующая

Таблица 1. Плотность (р, г/см3) и вязкость (г), СП) растворов сахарозы и глицерина
Параметр
Концентрация раствора, мае. %
15
20
25
35
40
45
50
Сахароза при 5°
р 11,0201 lf04111,06211,08411,1071 lf13111,1561 1,1821 1,2091 1,230
т] j 1,75312,073 j2,51313,13514,042 | 5,422 1 7,636 ]ll,453|l8,604J33,160
Глицерин при 5° 1
р II,01211,02511,038(1,05111,06511,07811,09211,10511,1191 1,133
т) 11,7691 2,073 j2,42912,85913,39714,1051 5,090 | 6,55218,904113,071
Сахароза при 20° ]
р II,018II,038 [1,059 II,081II,103II,127 II,t51 II,177II,2031 1,230?
ц 11,148 j 1,33711,592| 1,94612,4491 3,18414,323 j 6,163 [ 9,376115,420?
Глицерин при 20° р 11,01011,02211,03511,04711,060
т) 11,15911,33511,539 [ 1»7801 2,077
1,07311,08611,09911,1131 1,126! 2,460 j 2,98013,73414,910 [ 6,91ft
или буфера до 100 г (можно по объему, считая плотность водных растворов равной 1). Для сопоставления приведены также значения плотности и вязкости .растворов глицерина.
Следует отметить, что при увеличении температуры с 5 до 20° плотность растворов сахарозы и глицерина уменьшается незначительно, в то время как их вязкость падает весьма существенно, особенно в случае концентрированных растворов.
Для оценки возможности фракционирования в градиентах плотности сахарозы ниже приведены усредненные значения плавучей плотности (в г/см3) основных биологических объектов в растворах сахарозы:
Белки 1,24—1,32 Мембраны 1,13—1,18
ДНК 1,42 Митохондрии 1,19
Хроматин 1,36 Лизосомы 1,21
РНК 1,49 Хлоропласта 1,21
Рибосомы 1,41
Разумеется, эти данные ориентировочны и могут несколько изменяться от объекта к объекту. Однако из сопоставления их с табличными следует возможность зонально-скоростного фракционирования белков и нуклеиновых кислот при умеренных концентрациях растворов сахарозы (до 40%) и затруднительность такого фракционирования для мембран и содержащих мембраны органелл. Вместе с тем возможно их разделение в ступенчатых градиентах плотности сахарозы — на интерфазах.
Нередко в литературе концентрацию растворов сахарозы указывают в молях на литр или в виде процентного отношения массы сахарозы к объему раствора (m/V). Для удобства сопоставления данных и определения плотности по табл. 1 ниже представлен перевод выраженных таким образом концентраций в массовые проценты; по этим цифрам можно построить рабочие графики для пересчета:
Моль/л Мае. % Моль/л Мае. % Моль/л Мае. % m/V. •/, Mac. %
0,25 8,3 1,1 33,0 2,0 54,6 10 9,6
0,3 9,9 1,2 35,6 2,1 56,7 15 14,2
0,4 13,0 1,3 38,1 2,2 58,9 20 ft','*'
0,5 16,1 1,4 40,6 2,3 61,0 25 22,8
0,6 19,1 . 1,5 43,0 2,4 63,0 30 27,0
0,7 22,0 1,6 45,4 2,5 65,0 35 31,1
0,8 25,2 1,7 47,8 40 34,8
0,9 27,6 1,8 51,0 45 38,5
1,0 30,3 1,9 52,3 50 42,1
'60 49,0'
Следует обратить внимание на то, что содержание сахаррод в растворе в массовых процентах значительно ниже, чем коцце^г трация, выраженная отношением массы к объему (особенно; для концентрированных растворов). При анализе литературных данных надо точно знать способ выражения концентрации.
Сахароза — инертное, стабильное вещество, однако при авто-клавировании ее растворы могут карамелизоваться. Между тем их стерилизация нередко необходима, так как сахароза ввиду ее биологического происхождения может содержать примеси различных ферментов, в частности рибонуклеаз. Растворы сахарозы лучше всего стерилизовать добавлением (на 30 мин) до 0,1% диэтилпирокарбоната (ДЭП) — мощного ингибитора рибонуклеаз. После обработки ДЭП разлагают на С02 и этанол нагреванием раствора при 60° в течение нескольких часов. Следует помнить, что ДЭП очень ядовит!
Часто в сахарозе содержатся примеси тяжелых металлов. Их удаляют, пропуская раствор сахарозы через колонку, заполненную хелирующей смолой («Chelex-ЮО»). Загрязнения, поглощающие свет в ультрафиолетовой области, удаляют обработкой активированным углем (50 г угля добавляют к 1 л 50%-ного раствора сахарозы, кипятят в течение 5—10 мин и фильтруют).
Ряд фирм продает сверхчистые («RNase free») препараты сахарозы, однако не следует слишком доверять такой аттестации. Лучше все-таки в буфер для растворения сахарозы ввести ингибиторы нуклеаз или протеаз и ЭДТА, особенно если намечается длительное центрифугирование при комнатной температуре.
Предыдущая << 1 .. 91 92 93 94 95 96 < 97 > 98 99 100 101 102 103 .. 130 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed