Руководство по капилярному электрофорезу - Энгельгард Х.
Скачать (прямая ссылка):
Фирма MSE выпускает зональные роторы В-14 и В-15 аналогичной конструкции, причем каждый в двух вариантах (из алюминиевого сплава и титана). Зональными роторами (JCF-Z) на 20 тыс. об/мин комплектуются и лабораторные рефрижераторные центрифуги LJ-21 фирмы «Beckman».
Особенности эксплуатации и ухода
1. Не следует разгонять зональный ротор до больших скоростей, если он не заполнен целиком, т. е. до полного вытеснения воздуха из его полости. Изготовленная из норила крестовина может быть разорвана центробежными силами, если она не опирается на жидкость.
2. При заполнении и опорожнении ротора, особенно если меняется направление движения жидкости в системах каналов, надо тщательно избегать проникновения в ток жидкости воздушных пузырей. Такой пузырь, всплывая от периферии ротора к его центру, может нарушить плавность градиента плотности, поэтому при различных подключениях (сосудов к насосу, шприца к трубке и т. д.) соответствующие эластичные (и прозрачные) трубки должны быть зажаты артериальными зажимами. Полезно установить ловушку для воздушных пузырей на пути жидкости от насоса к периферической системе каналов ротора. Перед подключением всей системы наружных трубок и насоса к ротору надо проверить их чистоту и заполнить буфером, удалив весь воздух.
3. Главной проблемой при эксплуатации зонального ротора является опасность подтекания жидкости между двумя близко расположенными системами каналов -в переходном устройстве. На трущихся торцевых поверхностях двух цилиндров гидрав-
лического уплотнения йе должно быть царапин, выбоин и других повреждений. Торец нижнего цилиндра, изготовленного из мягкого рулона, можно подшлифовать вручную на чистой плоской поверхности. Верхний (стальной) цилиндр при наличии повреждений следует заменить. Надо иметь в виду, что материал этого цилиндра подвержен коррозии, поэтому его нельзя оставлять влажным. Коррозия торца цилиндра может развиться за одну ночь. Каждый раз после использования переходник надо разобрать и промыть, а все его детали высушить.
Подтекать могут и различные уплотнительные резинки, что можно обнаружить по появлению жидкости в центральной трубке в самом начале заполнения ротора. Во время заполнения целесообразно погрузить конец центральной трубки в стакан с водой и следить за непрерывностью така воздушных пузырей вплоть до окончания заполнения ротора. Подтекание системы уплотнений при подаче жидкости через центральную трубку (при внесении препарата) можно обнаружить, если конец трубки, идущей от периферической системы каналов ротора, погрузить в стакан с жидкостью той же плотности, что и «подушка» под градиентом. Менее плотная жидкость, с которой вносится препарат, при подтекании попадет в эту трубку, минуя ротор, и обнаружит себя в более плотной жидкости идущими вверх струйками.
Для предварительной проверки уплотнения ротор заполняют водой, подслаивают под нее плотную «подушку», а затем подают подкрашенную воду в центральный канал ротора. Быстрое появление краски в трубке периферической системы свидетельствует о подтеканиях. Помимо повреждения торцов трущихся цилиндров и резиновых прокладок, причинами подтекания могут служить ослабление пружины, прижимающей верхний цилиндр к нижнему; засорение каналов, ведущее к повышению противодавления при подаче жидкости; вибрация переходника при нецентральной его посадке на ротор или вследствие износа подшипника.
4. Если центрифугирование предполагается вести на холоду, зональный ротор предварительно охлаждают (в собранном виде) в течение 4—5 ч в холодной комнате. При этом его полость должна быть закрыта пробкой во избежание конденсации влаги внутри ротора. Заполнение градиентом ведут через змеевик, погруженный в баню со льдом, со скоростью 40—50 мл/ /мин. Препарат через центральную трубку наслаивают со скоростью 5—10 мл/мин. С такой же скоростью наслаивают и буфер на препарат.
.5. При равновесном центрифугировании в градиенте плотности раствора CsCl резиновое кольцо, уплотняющее крышку зонального ротора, желательно менять после каждого опыта, поскольку раствор CsCl разъедает резину. После опыта ротор разбирают, вынимают крестовину и все детали тщательно споласкивают теплой водой. Через каналы крестовины прогоняют •
теплую воду, а затем спирт для предохранения от появления микрофлоры. Засорившиеся каналы можно прочищать ершиком для курительной трубки.
Все уплотнительные резинки следует регулярно снимать* канавки и сами резинки промывать и сушить, резинки слегка смазывать вакуумной смазкой. Резьбу, на которую навинчивается крышка ротора, надо смазывать после каждой промывки. Необходимо следить за чистотой и смазкой подшипника переходника (он не должен шуметь), проверять степень сжатия и отсутствие коррозии пружины.
* * *
Ознакомившись достаточно подробно с используемой техникой, перейдем к рассмотрению основных методов ультрацентрифугирования, применяемых для очистки и фракционирования белков, нуклеиновых кислот и субклеточных органелл: дифференциального, зонально-скоростного и равновесного (изопикни-ческого). Они будут рассмотрены в этом же порядке. Под «частицами» будем, как и прежде, понимать не только молекулярные агрегаты, но и макромолекулы.
