Руководство по капилярному электрофорезу - Энгельгард Х.
Скачать (прямая ссылка):
Пробирки надо каждый раз внимательно осматривать, чтобы выявить трещины на дне пробирки или вдоль образующей цилиндрической ее части. Колпачок и втулку крышки следует проверять на отсутствие выбоин, трещин и эллиптичности. Особое внимание следует обратить на место перехода втулки в нарезной стержень. Надежность упора конуса уплотнительного винта следует проверить при сборке крышки.
Выбор и установка крышек, уравновешивание и герметизация пробирок описаны выше. Можно добавить, что уравновешивание следует производить с точностью, по крайней мере,
+ 0,1 г, поэтому предварительно следует проверить чувствительность весов.
Если одна из пробирок «холостая», т. е. служит только для уравновешивания, то ее следует заполнять жидкостью такой же плотности, как и в рабочей пробирке. Нередко заполнение рабочей пробирки бывает двухслойным. Например, на слой концентрированного раствора CsCl, занимающий иной раз лишь половину пробирки, наливают минеральное масло (см. ниже). В этом случае холостую пробирку следует заполнять точно так же для обеспечения одинакового положения центров тяжести в обеих пробирках. Нарушение этого требования приводит к вибрации ротора.
Отметим, что затяжка .крышки пробирки до упора, т. е. до тех пор, когда она не проворачивается на пробирке, не должна требовать большого усилия. Если крышка не «схватывается» пробиркой, следует проверить правильность выбора крышки, целость ее резинки, отсутствие влаги на поверхности пробирки у ее верхнего края, смазку стержня и неповрежденность его нарезки. Крышки красного цвета, особо нагружаемые при центрифугировании на максимальных оборотах, следует затягивать специальным, тарированным по усилию ключом. Герметичность пробирки после установки уплотнительного винта можно проверить, сжимая тонкостенную пробирку в руке.
Вынимать пробирку из ротора после окончания центрифугирования следует только с помощью специального приспособления, ввинчивающегося в стержень втулки. Целесообразно сначала слегка провернуть пробирку в гнезде, чтобы убедиться в отсутствии «присасывания» или таким образом избавиться от него, а уже затем вытягивать пробирку. Нельзя пользоваться для извлечения пробирок гаечным ключом, плоскогубцами и другими «подсобными» средствами, повреждающими гайку, крышку и края гнезда ротора.
Мыть пробирки и крышки следует в разобранном виде 1%-ным раствором нейтрального детергента, горячей и дистиллированной водой.
РОТОРЫ СО СВОБОДНО ПОДВЕШЕННЫМИ ПРОБИРКАМИ (БАКЕТ-РОТОРЫ)
Эти роторы несут три или шесть пробирок, устанавливаемых в свободно подвешенные металлические гильзы — «бакеты» (от английского «bucket» — «.ведро»). Первоначальная свободная подвеска служит только для фиксации исходного положения бакетов. Уже при малой частоте вращения ротора бакеты поворачиваются горизонтально, их упругая начальная подвеска слегка деформируется, и они опираются на тело ротора своими специальными мощными поясками-выступами. Контакт осуществляется по участку сферической поверхности.
Пробирки в бакеты устанавливают свободно, причем так, чтобы край пробирки выступал из гнезда на 3 мм. Это позволя-
ет легко вынимать пробирки пинцетом. Завинчивающиеся металлические колпачки герметизируют не пробирку, а всю внутреннюю полость каждого бакета. Уплотнение обеспечивается плоской резиновой прокладкой. Следует каждый раз проверять ее .наличие и чистоту и слегка смазывать вакуумной смазкой.
Все бакеты данного ротора имеют одинаковую массу, поэтому можно уравновешивать только пробирки. Однако необходимо убедиться, что гнезда бакета внутри сухие и чистые. В трехпозиционных бакет-роторах все три пробирки должны иметь одинаковый вес, а в шестипозиционных можно уравновешивать пробирки попарно, но все же желательно, чтобы вес всех пробирок был примерно одинаков. Последнее, впрочем, необязательно. Можно использовать шестипозиционный бакет-ротор для центрифугирования только двух, трех или четырех пробирок, но не при скоростях вращения, близких к максимальной.
Подвешивать бакеты следует только на «свои» места, в соответствии с выбитыми на них и на гнездах ротора номерами. В трехпозиционных бакет-роторах для первоначальной подвески используют ввинчивающуюся в тело ротора ось, проходящую через «ушки» бакета. Если на силовом пояске бакета имеется плоский участок, он обязательно должен быть обращен внутрь, к оси ротора. В шестипозиционных бакет-роторах подвеска осуществляется с помощью крючков, а иногда путем установки бакета в сферическое гнездо тремя последовательными движениями: снизу вверх, кнаружи и вниз. В любом случае экспериментатор обязан предварительно разобраться в системе подвески пустых бакетов в данном роторе и натренироваться в ее осуществлении. Правильно подвешенный бакет, независимо от системы, должен висеть вертикально и легко покачиваться в радиальном направлении по отношению к оси ротора. Неверно подвешенный бакет неизбежно явится причиной аварии центрифуги.
Переносить бакет-роторы и опускать их в камеру центрифуги следует, держа их за головку, а не за ножку, так как в последнем случае можно незаметно нарушить подвеску бакетов.
