Руководство по капилярному электрофорезу - Энгельгард Х.
Скачать (прямая ссылка):
Собственно пуск центрифуги. Горящая лампочка «Speed normal» указывает на правильность подготовки центрифуги к пуску. Его осуществляют нажатием кнопки «Start/run», которую надо держать несколько секунд, пока она не засветится.
Окончание работы центрифуги. После полной остановки ротора гаснет лампочка «Speed normal». Теперь можно выключить охлаждение (кнопка «Refrig.») и, убедившись, что с момента начала процесса остановки ротора уже прошло 5 мин, форвакуумный насос (кнопка «Vacuum»). Когда воздух заполнит камеру (прекратится шипение), можно отодвинуть крышку и вынуть ротор. Если центрифугирование вели с охлаждением, желательно немедленно закрыть камеру и снова включить форвакуумный насос, давая камере возможность прогреться до комнатной температуры без образования конденсата на ее стенках.
Не следует держать камеру открытой во избежание попадания пыли на уплотнительную кольцевую прокладку (Я). Ее следует периодически промывать спиртом и смазывать.
Глава 3 РОТОРЫ И ПРОБИРКИ
УГЛОВЫЕ РОТОРЫ
Угловые роторы (рис. 45) используют для сбора осадков при дифференциальном центрифугировании и для фракционирования частиц при равновесном центрифугировании (см. ниже). Фирма «Beckman» обозначает угловые роторы чкслом, указывающим максимально допустимое число оборотов. Если ротор изготовлен из титана, после цифры ставится значок «Ti». Иног-
да nocJte цифры cTont точка, за которой следует еще одна цифра, обозначающая вариант ротора для одного и того же максимального числа оборотов (50 Ti, 50.2 Ti, 50.3 Ti). Фирма MSE обозначает свои угловые роторы числом и объемом пробирок. Ниже рассмотрены более распространенные роторы фирмы «Beckman». Данные по роторам фирм MSE, «Dupont-Sorvalb, IEG, «Heraues Christ» можно найти в литературе [Rickwood, 1978].
Ниже перечислены важнейшие параметры углового ротора: число и объем пробирок; максимально допустимое число оборотов (для жидкости с плотностью рг=?
^1,2 г/см®); минимальное и максимальное расстояние концов пробирки от оси вращения (гмиа, тиакс); угол наклона пробирок а. Иногда указывают максимальное относительное центробежное ускорение (в единицах g— ускорения свободного падения); его принято вычислять
ДЛЯ Г макс*
Многочисленные угловые роторы фирмы «Beckman» можно разбить на следующие группы.
1. Высокоскоростные роторы (скорость вращения — 50—80 тыс. об/мин) с узкими и длинными пробирками (16Х Х76 мм) объемом 13,5 мл; угол а составляет 23,5—26°. К ним относятся следующие роторы: 50Ti, 65, 70.Hi, 75Ti и 80Ti. Все они имеют гтя в интервале 3,7—
3,9 см и гмако около 8 см и используются для быстрого осаждения малых частиц (узкие пробирки) или для равновесного ультрацентрифугирования. Кстати, по своей геометрии ротор 50Ti точно совпадает с широко использовавшимся недавно ротором 40.
2. Высокоскоростные роторы с пробирками относительно большого объема. Роторы 42.1, 50.2 Ti, 55.2 Ti, 60 Ti и 70 Ti имеют пробирки объемом по 38,5 мл, роторы 35 и 45 Ti — по 94 мл. Угол а для большинства этих роторов лежит в интервале 23— 25°, а у ротора 42.1 а=30°. Значения гмаис, естественно, больше, чем у роторов предыдущей группы (9—10,4 см), тогда как значения гтя такие же, как в группе 1 (3,5—3,9 см). Дальше обычного отстоят от оси вращения пробирки ротора 50.2 Ti, несущего 12 пробирок объемом по 38,5 мл (гмин=5,3 см, гмакс= 10,8см). Роторы этой группы, помимо осаждения частиц из разбавленных суспензий, могут также быть использованы для равновесного ультрацентрифугирования.
3. Роторы общего назначения из алюминия (19, 21, 30, 40 и 50) для широкого диапазона умеренных скоростей вращения (19—50 тыс. об/мин), чему соответствует широкий набор объемов пробирок (10—250 мл).
Рис. 45. Схема углового
ротора (см. текст)
4. Роторы с малым углом наклона пробирок (14—20е), удобные для флотации липидов (30.2, 40.3 и 50.3).
5.. Ротор 40.2 с необычно большим углом наклона (40°). Его следует предпочесть для осаждения частиц, плохо удерживающихся на стенке, так как в нем слабее выражена конвекция жидкости.
В последнее время начали появляться роторы необычной конструкции, например ротор 25 на 100 пробирок по 1 мл, расположенных в три ряда, или ротор LP-42Ti на 72 микропробирки по 0,175 мл.
На днище любого из роторов вокруг посадочного гнезда располагается разделенное на зеркальные и зачерненные секторы кольцо. Как уже указывалось, оно используется для аварийного выключения центрифуги в случае превышения допустимой для данного ротора скорости вращения. Кольцо удерживается липким составом. При повреждении его можно снять и заменить запасным, согласно инструкции фирмы. Замену кольца на другое, с большим числом секторов, следует произвести и после исчерпания ротором его первоначального ресурса работы, когда в силу усталости материала максимально допустимую скорость вращения следует снизить на 10%.
Крышки роторов снабжены уплотнительными резиновыми кольцами, которые смазывают и туго зажимают. Это необходимо для обеспечения герметичности внутренней полости ротора (отделения ее от камеры).
