Руководство по капилярному электрофорезу - Энгельгард Х.
Скачать (прямая ссылка):
Thuring R. W. Sanders Л P. М., Borst P.—Anal. Biochem., 1975, 66, p. 213-220.
Tiissen P.. Kurstak E.— Anal. Bio*
cITeni., 1979, 9§7p- 97—104.
Towbin H,, Staehelin Т., Gordon /.— Proc. Rat. Acad. Sci. USA, 1979, 76, p. 4350—4354.
Tung /.-S., Knight C. A — Anal. Biochem., 1972, 48, p. 153—163.
Turner V. S., Hopkinson D. A.— FEBS Lett, 1979, 105, p. 376—378.
Tuszynski G. P., Damsky С. HFuh-rer /. P., Warren L.— Anal. Biochem.,
1977, 83, p. 119—129.
Varricchio F., Ernst F. J.— Anal. Biochem, 1975, 68, p. 485—489.
Vogelstein B., Gillespie p.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1979, 76, p. 615-619.
Wahl G. М., Stern M.t Stark G. R.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1979, 76, p. 3683—3687.
Wallace R. W,t Yu P. H., Dieckert J. P, Dieckert J. W.— Anal. Biochem, 1974, 61, p. 85—92.
Walters /. A. L. /., Bont W. S.—Anal. Biochem, 1979, 93, p. 41—45.
Ward C. W.~ Anal. Biochem, 1976, 74, p. 242—245.
Watts /. W., King I. M, Sakai F.— Anal. Biochem, 1977, 79, p, 579— 582.
Weber K., Osborn M.— J. Biol. Chem,, 1969, 244, p. 4406-4412.
Weber K-\ Pringle Л Я, Osborn М.-Meth. Enzymol, 1972» 26, p. 3—27.
Weidekamm E., Wallach D. F. H., FliXc-kiger R.— Anal. Biochem, 1973, 54, p. 102—114.
Weliky N., Leaman D. tf. Kall-man B. /.— Anal. Biochem, 1975, 67, p. 507—514.
Wertz G. W, Davis N. LEd-gell M. N.— Anal. Biochem, 1980,
106, p. 148—155.
West D. W., Towers G. E.— Anal. Biochem, 1976, 75, p. 58—66.
Wienand U, Schwarz Z., Feix G.— FEBS Lett, 1979, 98, p. 319—322.
Wieslander L.— Anal. Biochem, 1979, 98, p. 305—309.
Wilson E. М., Spelsberg T. C.-^-Meth. Enzymol, 1975, 40, p. 171—176.
Winberg G., Hammarskjold M. L.— Nucl. Acids Res, 1980, 8, p. 253— 264.
Wood T. G., Shaeffer R.— Anal. Biochem, 1975, 63, p. 135—140.
Yaneva M, Mladenova Dessev G>— Anal. Biochem, 1977, 77, p. 332— 339.
Young Y. P. L., Young R. /.— Anal, Biochem, 1974, 58, p. 286—293.
Ziola B. R, Seraba D. G.— Anal. Biochem, 1976, 72, p. 366—371.
Часть вторая
УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЁ
Г
ВВЕДЕНИЕ
Современный этап развития молекулярной биологии и биохимии характеризуется быстрым прогрессом методов исследования и непрерывным совершенствованием, усложнением и удорожанием соответствующей аппаратуры. В то же время уровень подготовленности исследователей к использованию в полной мере новых методических возможностей и новой техники очень часто отстает от этого прогресса.
Такой разрыв имеет место и для методов фракционирования и характеристики биополимеров с помощью ультрацентрифугирования, несмотря на то что этот метод нельзя отнести к числу новых. Непрерывно совершенствуются и усложняются ультрацентрифуги, быстро растет ассортимент роторов, разнообразие их геометрических параметров и особенно быстро — максимальные скорости вращения, а вместе с ними и перегрузки материалов роторов и пробирок. Все это выдвигает совершенно новые требования к условиям эксплуатации ультрацентрифуг, уходу за роторами и пробирками. Незнание этих требований или пренебрежение ими в лучшем случае приводит к неудаче опыта, а в худшем и, к сожалению, нередком — к аварии столь дорогостоящей машины.
В последние годы один за другим были разработаны и успешно используются совершенно новые типы градиентов плотности взамен традиционных сахарозного и простых цезиевых. Это открыло такие возможности фракционирования, о которых еще три-четыре года назад не приходилось и мечтать (например, разделение совершенных и несовершенных гибридных молекул нуклеиновых кислот или нативных нуклеопротеидов по их плотности). Вместе с тем в силу такого расширения возможностей обоснованный выбор режима ультрацентрифугирования становится' все более трудным делом; по мнению некоторых авторитетов [Rickwood, 1978], его следует отнести к сфере искусства и интуиции.
Мы не согласны с такой точкой зрения и предлагаем здесь достаточно надежные способы предварительного выбора и расчета режима центрифугирования в соответствии с поставленной задачей. Они могут заменить обычную сегодня практику эмпирического подбора режима путем многочисленных пробных опы-
тов илй, некритического повторения описанных в литературе, зачастую Далеко не оптимальных условий эксперимента. Это весьма существенно с точки зрения экономии времени, ценных препаратов й, особенно, расходования весьма ограниченного ресурса продолжительности службы ультрацентрифуг и роторов.
В свете\изложенного мы приводим ниже все необходимые сведения о конструкциях и правилах эксплуатации ультрацентрифуги, роторов и пробирок на примере наиболее распространенной системы «Beckman-Spinco». Далее, опираясь на разбор физической сущности различных процессов седиментации при минимуме общедоступной теории, будут выведены упрощенные зависимости, позволяющие осуществлять выбор режима зонально-скоро-стного или равновесного центрифугирования. Для быстроты и удобства использования часть из них представлена в виде номограмм. Наконец, все, что было в периодической научной литературе до конца 1980 г. интересного в отношении новых типов градиентов и новых подходов к использованию ультрацентрифугирования, включено либо в основной текст, либо в иллюстрирующие его примеры. Все относящиеся к делу табличные данные включены в соответствующие разделы изложения.
