Руководство по капилярному электрофорезу - Энгельгард Х.
Скачать (прямая ссылка):
В качестве примера использования вставки типа В-29 и сбора фракций через периферический канал можно указать на работу, авторы которой очищали зональным центрифугированием в роторе Ti-15 гранулы зимогенов из поджелудочной железы крысы [Schneider, Smith, 1977].,
В ротор вводили 1 л градиента сахарозы (14—50%) и еще 0,25 л 50%-ной сахарозы подслаивали под него в качестве «подушки». Освобожденный от ядер гомогенат поджелудочных желез 8 крыс в 0,25 М сахарозе наслаивали через центральный канал, а поверх него вводили еще 50 мл 0,126 М сахарозы. Центрифугировали всего лишь 30 мин при 15000 об/мин, а затем опоражнивали ротор на скорости 2000 об/мин подачей воды через центральный канал. Вслед за подушкой 50%-ной сахарозы выходил четкий пик зимогенов, идентифицированный по ферментативной активности амилазы. Затем отдельно выходил пик митохондрий (сукцинатдегидрогеназная активность), а вслед за ним, в верхней половине градиента, все остальные компоненты гомогената.
Седиментационный анализ с использованием аналитической ультрацентрифуги не рассматривается в данной книге. В сравнительно недавнем прошлом этот метод использовался широко» особенно для определения молекулярных масс биополимеров. Сейчас, судя по числу публикаций и свертыванию производства аналитических ультрацентрифуг, сфера его применения явно сужается. Причинами этого, по-видимому, являются следующие:
1) ограниченная значимость получаемых данных, поскольку определяется молекулярная масса сильно сольватированных молекул, несущих на себе неопределенное количество молекул растворителя;
2) сложность и дороговизна аппаратуры;
3) развитие более простых и достаточно точных методов определения молекулярных масс и гомогенности биополимеров (гель-фильтрации, электрофореза в геле и электрофокусирования).
Тем не менее упомянем о двух публикациях, в которых аналитическое ультрацентрифугирование использовалось для определения молёкулярной массы белков- по методу , Арчибальда [Bernstine, 1979; Tack et al., 1979].
ЛИТЕРАТУРА
Aspray D. W., Pitts A., Pret low II Т. G.—Anal. Biochem., 1975 66, p. 353—364.
Bernstine E. G.—J. Biol. Chem., 1979 254, p. 83—87.
Bester Л. Durrheim G., Ken nedy />. S., Heywood S. M.— Bio chem. and Biophys. Res. Communs 1980, 92, p. 524—528.
Birnie G. /).— In: Centrifugal separa tions in molecular and cell biology I Ed. G. D. Birnie, D, Rickwood. L. Butterworth, 1978, p. 169, 170.
Burke R. LAnderson P. /. Bauer W. &— Anal. Biochem., 1978 86, p. 264—270.
Burke R. L, Bauer W. Я.— Nucl Acids Res., 1977, 4, p. 1891-1910
Cohen G., Eisenberg Biopolymers 1968, 6, p. 1877—1892.
Conrad 5. E., Campbell /. L— Nucl Acids Res., 1979, 6, p. 3289—3304
Cooper J. A.j, Moss J3.— Nucl. Acids Res., 1979, 6, p. 3599—3612.
Cortadas /., Macaya G.t Bernardi G.— Europ. J. Biochem., 1977, 76, p. 13— 19.
Cortadas /., Olofsson ВMeunier-Ro-tival М., Macaya G., Bernardi G.—
Europ. J. Biochem., 1979, 99, p. 179— 186.
Currier Г. C., N ester E. W.— Anal. Biochem., 1976, 76, p. 431—441.
Edsall D. T.t Maybury R. М., Simpson R. ВStraenle R.— J. Amer. Chem. Soc., 1954, 76, p. 3131—3140.
Gogstad G. O.—-Anal. Biochem., 1980, 106, p. 524—528.
Gonzalez F. J„ Garret С. Т., Wiener D., Caine M. D.—Anal. Biochem., 1978, 85, p. 146-156.
Harpold М. MDobner R., Evans R., Bancroft F. C.t Darnell J. ?.— Nucl. Acids Res., 1979, 6, p. 3133— 3144.
Hell A., Birnie G. D., Slimming T. K., Paul /.— Anal. Biochem., 1972, 48, p. 369-377.
Iain S. K, Sarkar S.—Biochemistry, 1979, 18, p. 745—753.
Kiper М., Bartels D., Herzfeld F., Richter G.— Nucl. Acids Res., 1979,
6, p. 1961—1978.
Konao Т., Nakajima У., Kawaka-mi М.—Biochim. et biophys. acta,
1979, 561, p. 526—534.
MacLeod М. C., Mansfield В. K., Huff A., Selkirk I. /С.— Anal. Biochem,, 1979, 97, p. 410—417.
Mansson P.-E.t Carter D. B., Silver-berg A. B.t Tully D. B.> Harris S. ?.— Nucl. Acids Res., 1979,
7, p, 1553—1565.
Martin T. E., Wool /. G., Cast-
les I. /.— Meth. Enzymol., 1971, 20» p. 417—429.
Maundrell K., Scherrer K — Europ. J. Biochem., 1979, 99, p. 225—238.
Maxwell E. S., Fischer M. 5.— Biochim. et biophys. acta, 1979, 562, p. 302— 318.
McCarty К S., Vollmer R. T., McCarty К. S.—Anal. Biochem., 1974, 61, p. 165-183.
Murphy R. F.f Wallace R. B., Bonner /.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA,
1980, 77, p. 3336—3340.
Okazaki /?.—Meth. Enzymol., 1971, 21, p. 296—304.
Otemck J. G., Lorenz P. E.— Anal. Biochem., 1979, 97, p. 72—76.
Panasci L. C.t Green D. C.t Fox P. A., Schein P. S.— Anal. Biochem., 1977, 83, p. 678—688.
Payvar P., Schimke R.— Europ. Biochem., 1979, 101, p. 271—282.
Pettijohn D. E., Pfenninger O.— Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1980, 77, p. 1331—1335.
Raafat El-Gewely M.t Helling R. B.— Anal Biochem., '1980, 102, p. 423— 428.
Ramsey J. C., Steele W. /.— Biochemistry, 1976, 15, p. 1704—1712.
Reich M.t Zarybnicky V.— Anal. Biochem., 1979, 94, p. 193—201.
Rennie P. S.—J. Biol. Chem., 1979, 254, p. 3947—3952.
