Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Энгельгард Х. -> "Руководство по капилярному электрофорезу" -> 10

Руководство по капилярному электрофорезу - Энгельгард Х.

Энгельгард Х. Руководство по капилярному электрофорезу — Москва, 1996. — 112 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvopokapilyaram1996.pdf
Предыдущая << 1 .. 4 5 6 7 8 9 < 10 > 11 12 13 14 15 16 .. 130 >> Следующая

ВЕРТИКАЛЬНО РАСПОЛОЖЕННЫЕ ТРУБКИ
Вертикальное расположение трубок и пластин имеет то преимущество, что препарат, наносимый на гель сверху, при любом его объеме равномерно покрывает всю рабочую поверхность геля. Затруднения при вертикальном расположении могут возни-
Рис. 5. Прибор для электрофореза в вертикальных трубках дв разрезе) (
1 — верхний электродный, ^ резервуар;
2 — центральный цилиндр; 3 — верхний платиновый электрод; 4 —резиновая прокладка; 5 — трубочка с гелем; € — нижний электродный резервуар; 7 — нижний платиновый электрод
кать для гелей, недостаточно прочно сцепленных со стеклом (см. выше). Под действием собственного веса они могут постепенно сползать вниз. Реальные трудности такого рода возникают, главным образом, в случае препаративного электрофореза, когда соотношение поверхности и объема колонок геля способствует его сползанию.
Все приборы с вертикальным расположением гелей конструктивно сложнее, чем аппараты с горизонтальным расположением, так как верхний электродный резервуар должен быть поднят над гелем. Приходится заботиться об уплотнениях в местах сочленения его с трубками или пластинами. В приборах с трубками для уплотнения обычно служат резиновые кольцевые прокладки, укрепленные в отверстиях на дне верхнего резервуара. Схема такого прибора показана на рис. 5.
Трубки (12—18 штук) с уже заполимеризованным в них гелем вставляют снизу в резиновые прокладки так, чтобы их верхние концы выступали над дном резервуара. Если используют не все трубки, то на их место ставят заглушки. Собранный вместе с трубками верхний электродный резервуар устанавливают на нижний так, чтобы концы трубок оказались на некотором расстоянии от дна последнего и заполняют нижний резервуар электродным буфером, нередко до такого уровня, что трубки-оказываются почти полностью погруженными в буфер. Это делается для улучшения теплоотвода в процессе электрофореза С этой же целью нижний буфер перемешивают магнитной мешалкой или вводят дополнительную систему с циркуляцией охлаждающей воды. Оба резервуара цилиндрической или прямоугольной формы изготавливают из плексигласа, что позволяет следить за продвижением. фронта красителя в процессе электрофореза. В резервуарах должны быть закреплены электроды из платиновой проволоки. Нижний электрод при этом должен располагать-
ся такДчтобы поднимающиеся от него пузырьки газа не попадали на нижние торцы трубок, что создавало бы помехи протеканию через них тока. Объемы электродных резервуаров достаточно велцки, чтобы pH находящегося в них буфера не изменялся под влиянием продуктов электролиза.
Стеклянные тонкостенные трубки, в которых ведут электрофорез, чаще всего имеют внутренний диаметр 5—6 мм и длину около 10 см. Фирма «Bio-Rad» в своем приборе модели 155 предлагает широкий набор трубок с внутренним диаметром от 2 до 14,6 мм и длиной от 7,5 до 30 см. Их можно монтировать в пяти сменных верхних резервуарах. Торцы трубок отшлифованы. При изготовлении трубок в лаборатории не следует оплавлять их в пламени горелки во избежание образования незаметного на глаз сужения, которое будет мешать извлечению геля после окончания электрофореза.
Для заливки и полимеризации геля нижние торцы трубок заклеивают парафильмом или лейкопластырем и устанавливают их строго вертикально в штатив. Деаэрированный раствор мономеров сразу после добавления и надежного смешивания с ним раствора персульфата аммония заливают по стенке трубки из пипетки с полиэтиленовым наконечником так, чтобы верхний участок трубки, предназначенный для внесения препарата, оставался сухим. Затем осторожно по стенке наслаивают воду или изобутанол и ведут полимеризацию, как описано в предыдущем разделе. Если готовят гель для ступенчатого электрофореза (см. ниже), то после окончания полимеризации нижнего (рабочего) геля воду стряхивают, споласкивают поверхности буфером верхнего (формирующего) геля и точно так же заливают слой раствора мономеров верхнего геля, а затем наслаивают на него воду или изобутанол. Перед установкой готовой трубки с гелем в прибор парафильм снимают, а ее свободный конец промывают верхним электродным буфером.
Собрав прибор, заливают буфер в верхний электродный резервуар. При полимеризации геля часть трубки с верхнего ее конца оставляют свободной, и туда при заливке попадает электродный буфер. Затем под него, на поверхность геля, пипеткой с оттянутым полиэтиленовым наконечником наслаивают препарат, в который добавляют предварительно 5—10% сахарозы. Наконечник пипетки не следует подносить вплотную к поверхности геля; препарат должен выливаться с высоты 2—3 мм над гелем и свободно растекаться по его поверхности за счет своей повышенной плотности. При любом варианте электрофореза надо быть уверенным в том, что исходный препарат свободен от взвешенных частиц (пыли или осадков), которые будут собираться на торце геля и нарушать однородность тока по его сечению, что повлечет за собой деформацию разделяющихся зон. В этом случае препарат следует отфильтровать или очистить центрифугированием.
Предыдущая << 1 .. 4 5 6 7 8 9 < 10 > 11 12 13 14 15 16 .. 130 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed