Теория и практика иммуноферментного анализа - Егоров А.М.
ISBN 5-06-000644-1
Скачать (прямая ссылка):
О ,
— аитигеи, специфические и антивидовые антитела соответственно
— компонент, в который введена ферментная метка
— иммобилизованный компонент
Таблица 4.2. Гетерогенные методы ИФА антител,
осиоваииые иа определении специфических иммуииых комплексов (тип I)
Меченый реагент Иммобилизованный реагент Неконкурентные Конкурентные
твердо гомоген твердо гомогеи*
фазные но* гете фазные но-гете-
рогенные рогенные
Антитела Специфическое Антиген Ц---
Антитело ^
Антнвидовое антитело |^
Антнвидовое Антиген | Есть
Антитело
Антнвидовое антителе Ц---^
Антиген (3“'© Антиген |
Антитело
Антнвидовое антитело | Есть 1
1 •
I
Таблица 4.3. Гетерогенные методы ИФА антигенов,
осиоваииые иа определении оставшихся свободными центров специфического связываиня (тип II)
Меченый реагент Иммобилизованный реагент Неконкурентные Конкурентные
твердо гомоген* твердо* гомоген
фазные но-гете* фазные но-гете
рогекиые рогенные
Антитела Специфическое Антиген ||---?) Есть Есть
Антитело |^
Антнвидовое антитело ^
Антнвидовое Антигеи ^---(^)
Антитело |^
Антнвидовое антитело
Антиген ---@ Антиген
Антитело ^
Антнвидовое антитело ^^
мере, две антигенные детерминанты, а для анализа большого числа моновалентных антигенов (например, стероидные гормоны, лекарственные соединения, пестициды) он неприемлем.
• Данная схема проведения анализа требует затраты большого времени, так как состоит из нескольких последовательных операций, однако обладает рядом существенных достоинств, обусловли-
Таблица 4.4. Гетерогенные методы ИФА антител,
основанные иа определении оставшихся .незанятыми мест специфического связываиия (тип II)
Меченый реагент Иммобилизованный реагент Неконкурентные Конкурентные
твердо гомоген твердо гомоген-
фазные но-гете фазные но-гете-
рогенные ро генные
Антитела Специфическое Антиген | Есть Есть
Антитело |j---^
Антивидовое антитело |
Антивидовое Антиген Ц---(^) Есть Есть
Антитело |j---^
Антивидовое антитело ||---^
Антиген Антиген Ц---
Антитело ^ Есть Есть
Антивидовое антитело ^
вающих ее широкое применение. Основным из них является высокая чувствительность метода, превышающая возможности других схем ИФА. Эффективность образования специфического комплекса на каждой стадии анализа зависит от равновесной константы связывания реакции антиген — антитело и концентрации компонентов. При данной константе связывания, характеризующей используемые в конкретном эксперименте антитела, и при крайне низких концентрациях антигена рассматриваемый метод дает возможность сдвигать равновесие в сторону образования специфических комплексов за счет использования избытка (по сравнению с Концентрацией антигена) иммобилизованных и меченных ферментом антител.
Максимальная чувствительность достигается при проведении Каждой иммунологической реакции в равновесном режиме, что и определяет длительность анализа, которая в среднем составляет 4—6 ч. Если не учитывать возможность неспецифических взаимодействий на стадии выявления специфических иммунокомплексов с помощью ферментного конъюгата, то предел обнаружения антиге-
нов данным методом зависит от чувствительности регистрации ферментной метки на носителе. При использовании высокочувствительных систем детекции ферментативной активности предел обнаружения соединений данным методом в настоящее время достигает величины порядка 10-21 моль, что соответствует обнаружению в образце всего 600 молекул анализируемого соединения.
