Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Егоров А.М. -> "Теория и практика иммуноферментного анализа" -> 14

Теория и практика иммуноферментного анализа - Егоров А.М.

Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилов Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа — М.: Высшая школа, 1991. — 288 c.
ISBN 5-06-000644-1
Скачать (прямая ссылка): teoriyaipraktika1999.djvu
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 123 >> Следующая

и имеющую размерность [моль/л]. Очевидно, что чем меньше Kd (или же, наоборот, больше Ка), тем прочнее образующийся иммунокомплекс.
Константа комплексообразования является термодинамическим параметром, характеризующим изменение свободной энергии взаимодействия антиген — антитело AF, которое может быть рассчитано по следующей формуле: '
bF = -RT\nKa, ..(3.5)
где R — газовая постоянная; Т — абсолютная температура.
Общее изменение свободной энергии при комплексообразова-нии складывается из двух термодинамических величин — изменений энтальпии и энтропии:
Д^=ДЯ-ГД5. (3.6)
Определение АН можно провести эксперимейтально— либо с помощью прямых калориметрических измерений, либо из зависимости равновесной константы комплексообразования от температуры, описываемой законом Вант-Гоффа: f(lnKa. А И
d(\IT) • R -
АН рассчитывают из температурной зависимости логарифма константы равновесия от обратной температуры (тангенс угла наклона прямой равен —ДHJR).
Зная изменения энтальпии равновесного процесса АН и свободной энергии AF, при данной :пшпературе изменение энтропии находят из соотношения
AS=(AH-AF)/T. (3.8)
Реакция антиген — антитело.протекает с выделением теплоты, но, как правило, изменение энтальпии невелико и составляет около 40 кДж/моль. Изменение энтропии в большинстве случаев положительно, так как активные центры антител в свободном виде доступны растворителю и гидратированы, а при взаимодействии с антигеном из них высвобождаются связанные молекулы воды, что приводит в целом к уменьшению упорядоченности системы.
• Таким образом, говоря об иммунологической специфичности антител, мы всегда проводим сравнительную оценку эффективности взаимодействия антиген—антитело, которое характеризуется константой равновесия или изменением свободной энергии системы при комплексообразовании.
Можно оценивать как специфичность данного антитела по отношению к различным антигенам, так и данного антигена по отношению к различным системам. Если одна и та же популяция антител взаимодействует с двумя различными антигенами Ari и Аг2 с константами комплексообразования соответственно /Ci и К.2 (Ki^Kz), то говорят, что данные антитела являются высоко специфическими по отношению к Ап и менее специфическими к Агг. Аналогично, если константа комплексообразования антигена с популяцией антител Atj много больше, чем с антителами Атг, то первые являются специфическими по отношению к антигену, а вторые нет. Еще раз подчеркнем, что понятие специфичности является относительным. Например, если для одной и той же популяции антител взаимодействие с антигеном Arj по сравнению с Агг является специфическим, то при наличии третьего антигена Агз, для которого Кз'Жи эти антитела будут менее специфичны к Ari, чем к Агз.
На практике часто условно подразумевают, что если константа равновесия процесса комплексообразования больше, чем 10® л/моль, то антитела являются высокоаффинными,
Обычный диапазон изменения аффинности антител составляет 105—10й М-1, что соответствует изменению свободной энергии связывания в области —24-=—52 кДж/моль. Максимальные значения констант связывания характерны для антигенов, обладающих ярко выраженными гидрофобными свойствами или же взаимодействующих с активным центром антитела достаточно большой областью молекулы. Наименьшей эффективностью взаимодейст-
Вия характеризуются антитела против углеводов (7Са< 10е— 108 л/моль).
Ф Таким образом, количественно специфичность можно оценить, измеряя изменение свободной энергии связывания или внутреннюю аффинность. В практических целях иногда очень важно провести сравнение специфичности взаимодействия ряда антигенов с антителами, индуцированными одним из этих антигенов. Относительная специфичность в этих случаях может быть выражена как отношение внутренних аффинностей взаимодействия с антителами рассматриваемого антигена и антигена, индуцировавшего антитела.
Подобного рода проблемы очень часто возникают, например, при разработке методов иммуноферментного анализа лекарственных препаратов, стероидных и белковых гормонов. В зависимости от способа получения антисыворотки антитела могут быть специфичны либо только к одному лекарственному препарату (гап-тену), либо к целой группе близких по структуре химических соединений. В этих случаях распространен способ оценки специфичности, основанный на сравнении связывания антител в данной концентрации (или в определенном разведении иммунной сыворотки) одного и того же количества гомологичного и гетердлогичного гап-тена. При этом концентрация образовавшегося иммунного комплекса для гомологичного гаптена принимается равной единице, а связывание всех гетерологичных гаптенов оценивается как доля от соответствующего связывания гомологичного гаптена.
Представляет большой интерес и оценка специфичности различных популяций антител, например различных типов моноклональных антител, продуцируемых разными клонами клеток. Такое сравнение может быть проведено на основании сопоставления значений внутренней аффинности: антитела с более высокой специфичностью характеризуются более высоким значением константы внутренней аффинности.
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 123 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed