Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Егоров А.М. -> "Теория и практика имуноферментного анализа" -> 13

Теория и практика имуноферментного анализа - Егоров А.М.

Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б. Теория и практика имуноферментного анализа — М.: Высшая школа, 1991. — 288 c.
ISBN 5-06-000644-1
Скачать (прямая ссылка): teoriyaimuntoferniy1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 115 >> Следующая

Вполне понятно, что один и тот же антиген могут узнавать антитела, имеющие комплементарные ему структуры, но несколько отличающиеся по составу аминокислотных остатков в антигенсвя-зывающем центре. Например, антигенсвязывающая область анти-декстраноього антитела человека в одном случае представляет собой неглубокий «желобок», в который укладывается до 6 остатков изомальтозы, в другом — состоит из глубокой полости, куда помещается 1—2 остатка, и более мелкой выемки для 2—4 остатков изомальтозы.
С другой стороны, антигенсвязывающий центр молекулы антитела определенной специфичности обладает способностью связывать антигены, отличные по структуре от основного. Можно представить себе, что в таком случае в связывании принимают участие как часть общих аминокислотных остатков в антигенсвязывающих центрах, так и отличающихся по своей локализации и природе.
С количественной стороны специфичность взаимодействия антиген— антитело характеризуется через аффинность антител или
34
равновесную константу образования иммунокомплекса. В простейшем случае взаимодействие одного центра связывания антитела с Ионовалентным антигеном может быть представлено схемой л.
Ar-f Ат7=^Аг-Ат, (3.1)
*-i
где Аг — свободный антиген; Ат — свободное антитело; Аг-Ат— комплекс антиген — антитело; k\ и k-\ — константы скоростей ассоциации и диссоциации комплекса соответственно.
С учетом закона действующих масс в условиях равновесия можно записать
Л1[Аг][Ат]=^_1 [Аг-Ат], (3.2)
где [Аг], [Ат], [Аг-Ат]—равновесные концентрации Аг, Ат и комплекса Аг-Ат, соответственно, или при переходе к константе равновесия или внутренней аффинности (Ка)'?
_is _ [Аг-Ат] /о о\
*_1 * [Аг] - [Ат] ' ^ ‘ '
Равновесная константа образования Ка иммунокомплекса имеет размерность [л/моль]. На практике часто используют равновесную константу диссоциации комплекса Ка, связанную с Ка простым соотношением
Kd=\fKa (3.4)
и имеющую размерность [моль/л]. Очевидно, что чем меньше Kd (или же, наоборот, больше Ка), тем прочнее образующийся иммунокомплекс.
Константа комплексообразования является термодинамическим параметром, характеризующим изменение свободной энергии взаимодействия антиген — антитело ДF, которое может быть рассчитано по следующей формуле:
LF = -RT In Ка, (3.5)
где R — газовая постоянная; Т — абсолютная температура.
Общее изменение свободной энергии при комплексообразова-нии складывается из двух термодинамических величин — изменений энтальпии и энтропии:
Д/^ДЯ-ГДЗ. (3.6)
Определение АН можно провести экспериментально — либо с помощью прямых калориметрических измерений, либо из зависимости равновесной константы комплексообразования от температуры, описываемой законом Вант-Гоффа:
_а In Kg , ан HljT) ? r •
35
А Я рассчитывают нз температурной зависимости логарифма константы равновесия от обратной температуры (тангенс угла наклона прямой равен —ДHJR).
Зная изменения энтальпии равновесного процесса АН и свободной энергии AF, при данной температуре изменение энтропии находят из соотношения
A5=(A//-AF)/r. (3.8)
Реакция антиген — антитело .протекает с выделением теплоты, но, как правило, изменение энтальпии невелико и составляет около 40 кДж/моль. Изменение энтропии в большинстве случаев положительно, так как активные центры антител в свободном виде доступны растворителю и гидратированы, а при взаимодействии с антигеном из них высвобождаются связанные молекулы воды, что приводит в целом к уменьшению упорядоченности системы.
• Таким образом, говоря об иммунологической специфичности антител, мы всегда проводим сравнительную оценку эффективности взаимодействия антиген — антитело, которое характеризуется константой равновесия или изменением свободной энергии системы при комплексообразовании.
Можно оценивать как специфичность данного антитела по отношению к различным антигенам, так и данного антигена по отношению к различным системам. Если одна и та же популяция антител взаимодействует с двумя различными антигенами Ап и Аг2 с константами комплексообразования соответственно К\ и Къ (/ч^Кг), то говорят, что данные антитела являются высоко специфическими по отношению к Arj и менее специфическими к Аг2. Аналогично, если константа комплексообразования антигена с популяцией антител Ati много больше, чем с антителами Ат2, то первые являются специфическими по отношению к антигену, а вторые нет. Еще раз подчеркнем, что понятие специфичности является относительным. Например, если для одной и той же популяции антител взаимодействие с антигеном Ari по сравнению с Аг2 является специфическим, то при наличии третьего антигена Агз, для которого Кз>Кп эти антитела будут менее специфичны к Ari, чем к Агз.
На практике часто условно подразумевают, что если константа равновесия процесса комплексообразования больше, чем 108 л/моль, то антитела являются высокоаффинными.
Обычный диапазон изменения аффинности антител составляет 105—10й М-1, что соответствует изменению свободной энергии связывания в области —24ч—52 кДж/моль. Максимальные значения констант связывания характерны для антигенов, обладающих ярко выраженными гидрофобными свойствами или же взаимодействующих с активным центром антитела достаточно большой областью молекулы. Наименьшей эффективностью взаимодейст-
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 115 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed