Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
304
6.1.
Введение.....................................................304
6.1.1. Принцип организации генов
растений..................304
6.1.2. Строение
мРНК..........................................306
6.1.3. Перенос продуктов генов в клетке.......................
306
6.1.4. Использование генетической трансформации для изучения
экспрессии генов
растений................................307
6.1.5. Использование трансгенных растений для изучения
последовательностей, регулирующих транскрипцию . . .
308
6.1.6. Изучение регуляторных последовательностей с помощью
индикаторных генов............................. . . ,
308
Оглавление
407
6.2. Изучение организации Т-ДНК методом блоттинг-гибридизации
по Саузерну..............................................
6.2.1. Общие положения ..........................
6.2.2. Организация последовательностей чужеродной ДНК в
тканях растений ........................................
6.2.3. Изучение организации Т-ДНК в трансгенных растениях
моркови методом блоттинг-гибридизации ....
6.3. Анализ экспрессии генов методом точечного нозерн-блоттинга
6.3.1. Регуляция транскрипции гена Cab в этиолированном
растении гороха под действием фитохрома..........................
6.4. Использование CAT в качестве индикаторного гена для изуче-
ния контроля экспрессии генов в различных органах и при
изменении условий среды.................................
6.4.1. Общие положения......................................
6.4.2. Определение активности хлорамфениколацетилтрансфе-
разы (CAT)..............................................
6.4.3. Примеры использования cat в качестве индикатор-
ного гена для изучения контроля экспрессии гена СаЬ-cat в
различных органах и в зависимости от условий среды
..................................................
6.5. Применение неомицинфосфотрансферазы-П (NPT-II) в качестве
индикаторного белка для изучения роли последовательностей, участвующих в
переносе белков (транзитных пептидов)
6.5.1. Общие положения ... ......................
6.6. Выделение интактных хлоропластов табака.....................
6.6.1. Общие положения.................................. .
6.6.2. Обеспечение..........................................
6.6.3. Методика.............................................
.6.7. Определение активности NPT-II in situ.......................
6.7.1. Общие положения......................................
6.7.2. Неденатурирующий электрофорез в полиакриламидном
геле....................................................
6.7.3. Определение NPT-II in situ после электрофореза
6.8. Определение NPT-II методом вестерн-блоттинга ....
6.8.1, Общие положения .....................................
6.9. Получение химерных генов с последовательностями, кодирующими
индикаторный фермент: система слияния с геном GUS
6.9.1. Общие положения .... ..................
6.9.2. Слияние с геном GUS..................................
6.9.3. Определение активности GUS в экстрактах растений
6.9.4. Выделение GUS из тканей растений . . ¦ . ,
6.9.5. Флуориметрическое определение активности GUS
6.9.6. Выявление GUS in situ с использованием денатурирующего
полиакриламидного геля...................................
6.9.7. Гистохимическое выявление GUS иа срезах тканей растений
............................................. . . .
6.10. Определение нопалина в трансформированных растительных тканях
...........................................................
6.10.1. Общие положения......................................
6.10.2. Обеспечение..........................................
6.10.3. Методика.............................................
Приложение 6 [I]......................................................
Нозерн-блоттинг .............................................
Приложение 6 [II]..........................................
Выделение NPT-II и CAT из бактерий...........................
Приложение 6 [III]....................................................
Определение концентрации белка по Бредфорду .
311
311
313
317
324
326
331
331
333
З3б
340
340
343
343
344-
345
346
346
347 352 357 357
362
363
364 366 366 368
371
374
377
377
378
379 383 383 385
385
386 38?
408
Оглавление
Приложение 6 [IV] .
...........................................386
Определение агропииа и
маниопииа..............................386
