Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
агробактерии ...................................................... 72
1.10.1. Основные положения ..................................72
1.10.2. Обеспечение..........................................74
1.10.3. Методика.............................. ....
75
1.11. Выделение тотальных препаратов нуклеиновых кислот из A. tu-
mejaciens.................................................76
1.11.1. Основные положения...............................
76
1.11.2. Обеспечение..........................................76
1.11.3. Методика (модифицирована по [17]) . .
77
1.12. Рестрикционный гидролиз тотальной ДНК агробактерий . .
78
1.12.1. Основные положения . .........................78
Приложение 1 [I]......................................................80
Обычное оборудование для молекулярно-биологических исследований
...................................... .... 80
Приложение 1 [II]..................................................82
А. Используемые в примерах бактериальные штаммы . .
82
Б. Антибиотики, используемые для селекции бактерий . .
82
Литература.........................................................83
Глава 2. Трансформация клеток двудольных растений с помощью Ti-плазмид
Agrobacterium tumefaciens и Ri-плазмид A. rhizogenes. Дж. Дрейпер, Р.
Скотт, Дж. Хэмил..............................87
2.1. Введение....................................................87
2.1.1. Основные свойства агробактерий и векторов, которые
используются для трансформации клеток растений . . 88
2.1.2. Поведение культивируемых растительных клеток, влияющее
на нх трансформацию агробактериями .... 92
2.1.3. Селекция трансформированных тканей и регенерация
растений................................................95
2.1.4. Основные методы трансформации растительных клеток
с помощью агробактериальных векторов ....
103
2.2. Трансформация с помощью онкогенных штаммов дикого типа
A. tumfaciens и A. rhizogenes................................105
2.2.1. Основные положения...................................105
2.2.2. Обеспечение . ..........................
110
2.2.3. Методика . . ...............¦.................111
2.3. Трансформация больших гетерогенных эксплантатов с помощью
неонкогенных Ti-плазмидных векторов..........................117
2.4. Прямая регенерация трансформированных растений: трансформация
листовых дисков табака...............................119
2.4.1. Основные положения...................................119
2.4.2. Обеспечение...................................
121
2.4.3. Методика..........................................122
2.5. Регенерация трансформированных растений через стадию каллуса:
трансформация эксплантатов проростков льна , . . 130
2.5.1. Основные положения . .........................130
404
Оглавление
2.5.2. Получение стерильных проростков льна н регенерация
из эксплантатов проростков льна .......................
132
2.5.3. Трансформация гипокотилей, регенерация из трансформи-
рованного каллуса, селекция, размножение и укоренение
трансформированных побегов.........................135
2.6. Трансформация малых гомогенных эксплантатов . , , .
140
2.6.1. Оснонные положения...........................
140
2.6.2. Разработка систем совместного культивирования .
141
2.7. Выделение мезофильных протопластов табака ....
143
2.7.1. Оснонные положения ... ..................143
2.7.2. Обеспечение..........................................145
2.7.3. Методика.............................................146
2.8. Культивирование мезофильных протопластов табака . . .
149
2.8.1. Основные положения...................................149
2.8.2. Обеспечение..........................................150
2.8.3. Методика.............................................150
2.9. Трансформация протопластов путем совместного культивирования с
агробактериями........................................151
2.9.1. Основные положения...................................151
2.9.2. Обеспечение..........................................152
2.9.3. Методика.............................................153
2.10. Трансформация клеток суспензионной культуры моркови .
160
2.10.1. Основные положения...................................160
