Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
действующих w'r-генов, его называют бинарным вектором.
20
Глава I
Таблица 1.1. Примеры Ti-плазмидных векторов коинтегративиого типа
Клонирующий (про Wr-плазмида хозяи Область Начало реп- Плазмиды-по-
межуточный) в'ек* на для коиитегра- гомологии ликации, ori МОЩИИКИ,
тор (размер) ции МоЬУТга
PMON2001) ртабБЗ-ЗЕ1" LIH pBR322 pR64drdll
{9,5 т. п. н.) (GV3111) (Col El) pGJ23
(JMlOl)
pMON2732) PTiB6S3-SE LIH pBR322 JMlOl
(10 т. п. н.) (GV3111)
pMON3162> pTiB6S3-SE LIH pBR322 JMlOl
(11 Т.П.Н.) (GV3111)
pGVl 1033> pGV38504> Ген Арг pBR322 JMlOl
(6,5 т. п. н.). (С58С1)
pGV8315> pGV22605) Ген Арг pBR322 JMlOl
(8,9 т. п. н.) (C58C1)
') 121Г; 2) [441; ') [26]; 4) [61]; 5) 115]. *) pMON316 - удобный вектор
для экспрессии.
1.1.7.1. Цис-векторы
Векторы этого типа представляют собой производные Ti-плазмид дикого
типа, из которых онкогены Т-ДНК были удалены и в некоторых случаях
заменены на особый фрагмент ДНК, имеющий область гомологии с небольшим
клонирующим вектором, способным реплицироваться только в Е. coli. Эта
стратегия основана на коинтеграции в клетках A. tumefaciens между
гомологичными областями на модифицированной Ti-плазмиде (ш'г-хел-пере) и
небольшом клонирующем (промежуточном) векторе Е. coli, содержащем
селективный маркерный ген, который предназначен для работы в растительных
клетках, и уникальные сайты для встраивания чужеродной ДНК-
Промежуточный вектор, содержащий последовательности чужеродной ДНК,
обычно вводят в A. tumefaciens путем конъю-
Агробактериальные трансформирующие векторы растений 21
(чис-действующие гпг-геиы).
Бактериаль Граница Растительный Nos/ocs Сайты для клонирования.
ный селек т-днк селективный Примечания
тивный мар маркер
кер
Sm/Sp Rb(SEV) nos-пр/*// Nos Уникальные сайты
pTiT37 ?coRI, Hindlll, Xbal,
Xhol
Sm/Sp Rb(SEV) CaMV35S- Nos Уникальный сайт
pTiT37 npt-II Hindlll
Sm/Sp Rb(SEV) nos-npt-II Nos Уникальные сайты
pTiT37 В gill, Clal, Kpnl и
?coRI, локализующиеся
между промотором
CaMV-35S и Nos-сайтом
присоединения poly (А)6)
Km Нет nos-npt-II --- ?coRI
Дуплицированная после
довательность pBR322
между границами
Т-ДНК
Sm/Sp Rb/Lb nos-npt-II Ocs BamHl
pTiB6S3 Дуплицированные после
довательности pBR322
ие находятся между гра
ницами Т-ДНК
гации, а затем с помощью соответствующего метода селекции могут быть
получены трансконъюганты, в которых в результате гомологичной
рекомбинации чужеродная ДНК стабилизировалась в составе Т-ДНК (рис. 1.3,
А).
У некоторых векторов, таких, как pGV3850 (рис. 1.4), обе границы
Т-ДНК находятся на модифицированной Ti-плазмиде. У таких векторов, как
pGV2260 [15], повторы длиной 25 п. н. находятся в промежуточном векторе,
тогда как в pTiB6S3-SE (вектор "сращиваемых концов" - от англ. split-end
vector, L21 ]) правая граница находится на промежуточном векторе, а левая
граница Т-ДНК на уг'г-плазмиде. Независимо от исходных положений повторов
длиной 25 п. н. конечный результат коинтег-рации заключается в инсерции
последовательностей чужеродной ДНК между концевыми повторами Т-ДНК в
составе модифици-
22
Глава 1
Таблица 1.2. Примеры бинарных векторов (транс-действующие vir-гены)
Клонирующий Вирулентная плаз Начало репли Штамм бак Бактери
вектор (размер) мида-помощник кации плазмиды терии-хо альный
с широким кру зяина селектив
гом хозяев ный мар
