Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Диксон М. -> "Ферменты 2" -> 60

Ферменты 2 - Диксон М.

Диксон М., Уэбб Э. Ферменты 2 — М.: Мир, 1982. — 515 c.
Скачать (прямая ссылка): fermentit21982.djvu
Предыдущая << 1 .. 54 55 56 57 58 59 < 60 > 61 62 63 64 65 66 .. 158 >> Следующая

остатков гистидина предотвращает модификацию другого.
Модификация группы фермента специфическим реагентом, приводящая к утрате
активности, не обязательно свидетельствует о том, что данная находящаяся
на поверхности фермента группа входит в состав его активного центра.
Модификация может вызывать конформационное изменение, сопровождающееся
потерей активности, и поэтому при установлении корреляции между утратой
активности и модификацией специфического остатка аминокислоты необходимо
выяснить, не происходит ли изменение конформации фермента. Следует,
конечно, иметь в виду, что, если такое изменение конформации обнаружено,
эта еще не означает, что оно является единственной причиной инактивации.
Например, взаимодействие высокореакционноспособных сульфгидрильных групп,
входящих в состав активного центра глицеральдегидфосфатдегидрогеназы (КФ
1.2.1.12), с "-хлор-
Ингибирование и активация ферментов
543
меркурибензоатом сопровождается конформационным изменением фермента [
1242]. Все это затрудняет интерпретацию результатов. Особый случай
ингибирования, приводящего к потере активности, наблюдается в системе, в
которой фермент находится в двух формах - активной и развернутой
неактивной, между которыми существует равновесие (такая ситуация
наблюдается в определенных условиях для химотрипсина (КФ 3.4.21.1)
[1328]. В этом случае реагент, способный взаимодействовать только с
неактивной формой фермента, будет вызывать ингибирование путем смещения
равновесия.
Одним из доказательств того, что модифицируемая группа находится в
активном центре, может служить защита фермента от необратимого
ингибирования при введении в систему субстрата или его аналога. Однако из
теории индуцированного соответствия, рассматриваемой в гл. 4 и 10,
следует, что сопровождающие связывание субстрата конформационные
изменения могут приводить к защите групп, находящихся вне активного
центра. Противоположную ситуацию, когда в присутствии субстрата
реакционная способность специфических аминокислотных остатков фермента
увеличивается, наблюдали в случае химотрипсина [1102].
Если специфический аминокислотный остаток в белке обладает повышенной
реакционной способностью по отношению к определенному реагенту,
интерпретация результатов необратимого ингибирования упрощается.
Соответствующие примеры обсуждаются в гл. 7.
Особая группа специфических необратимых ингибиторов была получена путем
введения в аналоги субстратов группировок, способных необратимо
реагировать с боковыми цепями аминокислот в активном центре фермента. Эти
ингибиторы получили название "ингибиторы, направленные на активный
центр", или "аффинные метки". Они детально рассмотрены в работах [249,
4224, 4225]. Эффективность этих соединений обусловлена тем, что благодаря
сродству к ферменту они вводят реакционноспособную группировку в область
активного центра. Примеры аффинных меток активных центров трипсина (КФ
3.4.21.4) и химотрипсина (КФ 3.4.21.1) приведены в табл. 8.5. Утрата
ферментом активности при действии этих ингибиторов не всегда, однако,
означает, что модифицируемая группа фермента входит в состав его
каталитического аппарата; говоря более точно, рассматриваемая группа
находится в области активного центра. Это можно проиллюстрировать на
примере действия ингибиторов, приведенных в табл. 8.5; так,
тозилфенилаланинхлорметан инактивирует химотрипсин в результате реакции с
остатком гистидина, который, как свидетельствует ряд данных, необходим
для каталитической активности; в то же время 3-фенокси-1,2-эпоксипропан
вызывает ингибирование фермента, реагируя с
Таблица 8.5
Субстраты и направленные на активный центр специфические ингибиторы
трипсина и химотрипсина
Субстрат нля ингибитор Фермент Модифицируемый остаток
0 у H2N (СН,) 4-СН-с-с2н5 Трипсин _
NH-толуолсульфонил
Этиловый эфир тозиллизина (субстрат)
О II H2N (СН,) 4-CH-C-CH2CI ) Трипсин His-46
NH-толуолсульфонил
Тозиллизинхлорметан (ингибитор)
о <Т^2>-СН2-СН-С-С2Н5 Химотрипсин -
V t 1 NH-толуолсульфонил
Этиловый эфир тозилфенилаланина (субстрат)
о <^^СН2-СН-С-СН2С1 NH-толуолсульфонил Химотрипсин His-57
Тозилфенилаланинхлорметан (ингибитор)
/(у>-осн2-сн - сн2 %Jr V Химотрипсин Met-192
3-фенокси-1,2-эпоксипропан (ингибитор) Q
Ох'~а и Химотрипсин Ser-195
Дифенилкарбамоилхлорид (ингибитор)
Ингибирование и активация ферментов
545
остатком метионина, который, вероятно, не участвует в каталитическом
процессе, но расположен столь близко к остаткам активного центра, что его
модификация приводит к потере активности.
Не все направленные на активный центр ингибиторы модифицируют
специфические группы фермента. Особенно интересный случай исследовали
Чейз и Туббс [750]; они показали, что аналог субстрата
карнитинацетилтрансферазы (КФ 2.3.1.7) бромацетилкарнитин может вызвать
ингибирование в результате реакции с сульфгидрильной группой другого
субстрата этого фермента - кофермента А; при этом образуется аналог обоих
Предыдущая << 1 .. 54 55 56 57 58 59 < 60 > 61 62 63 64 65 66 .. 158 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed