Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Диксон М. -> "Ферменты 2" -> 55

Ферменты 2 - Диксон М.

Диксон М., Уэбб Э. Ферменты 2 — М.: Мир, 1982. — 515 c.
Скачать (прямая ссылка): fermentit21982.djvu
Предыдущая << 1 .. 49 50 51 52 53 54 < 55 > 56 57 58 59 60 61 .. 158 >> Следующая

уменьшение k+2, либо через изменение Kesi или Де.,2 [уравнение (4.256)].
Влияние только на k+2 будет иметь место, если скорость распада активных
ионных форм EIS окажется меньшей, чем скорость распада активных ионных
форм ES; эффективная величина k+2 будет тогда занимать промежуточное
положение между k+2 для ES и к+2 для EIS. Обе эти величины не зависят от
pH, но эффективная величина k+2 будет изменяться с pH, если под влиянием
pH Ki изменяется. Следовательно, при изменении pH эффективная величина
k+2 может изменяться от k+2 для ES до k+2 для EIS.
На Kesi и Kes2 ингибитор может влиять либо в результате прямого
соединения с кислотной или основной группой в активном центре, либо .в
результате соединения с группой, расположенной по соседству. И в этом
случае эффективные значения этих констант будут лежать между
соответствующими величинами для ES и EIS, а характер изменения кривой pH
- активность будет таким же, как при неспецифическом действии анионов
(см. с. 564; ср. рис. 8.27). Влияние pH на ингибирование будет в этом
случае весьма заметным; сдвиг кривой pH - ак-
Ингибирование и активация ферментов
529
Рис. 8.13. Влияние pH на ингибирование каталазы под действием NH3 и HCN
[727].
тивность может даже указывать, что данное вещество, действующее как
ингибитор при одном pH, при другом значении pH будет действовать как
активатор.
При ингибировании конкурентного типа комплекс EIS не образуется, но
эффективная константа Михаэлиса Кр может изменяться с pH, если изменяется
либо Дм, либо К%, потому что если при изменении pH изменяется сродство
фермента к субстрату иди к ингибитору, то и степень ингибирования должна
измениться. Интерпретация влияния pH на Дм с учетом величин рД для групп,
у которых при соединении фермента с субстратом изменяется степень
ионизации, уже обсуждалась в гл. 4. Там же было отмечено, что подобный
анализ применим и к интерпретации влияния pH на Д* с учетом величин рД
для групп, у которых степень ионизации изменяется при соединении фермента
с ингибитором [уравнения (4.269) - (4.270)]. На графике зависимости рД*
от pH величины рД этих групп определяются по положению точек перегиба;
правила, изложенные на с. 222-223, применимы также и к этому графику. В
качестве иллюстрации на рис. 8.13 приведены кривые зависимости рДг от pH,
заимствованные из работы Чанса [727], для ингибирования каталазы
азотоводородной и синильной кислотами. Точка перегиба на каждой кривой
приблизительно соответствует рК ингибитора. Форма кривых указывает на то,
что соединение со свободной кислотой происходит без какого-либо изменения
заряда, тогда как соединение с анионом ингибитора приводит к образованию
нейтрального соединения и исчезновению отрицательного заряда.
Массей ([3012], рис. 2 и 3) опубликовал ряд кривых зависимости рД, от pH
для ингибирования фумаратгидратазы раз-
530
Глава 8
личными двухосновными кислотами. Эти данные наглядно иллюстрируют, как
велика роль pH при ингибировании ферментов, и показывают, в чем она может
проявляться; следует только учесть, что действие фумаратгидратазы
осложняется наличием анионных эффектов (подробнее об этом см. ниже). К
сожалению, очень мало других ингибиторов изучалось под таким углом
зрения. Между тем подобное изучение могло бы пролить свет на природу
активного центра ферментов и на механизм действия конкурентных
ингибиторов. В связи с этим следует отметить, что определение Ki имеет
преимущество перед определением Км., ибо первая из этих величин всегда
представляет собой истинную константу равновесия, характеризующую
сродство фермента и ингибитора, и не содержит кинетического элемента,
который может оказывать влияние на Км-
НЕОБРАТИМОЕ ИНГИБИРОВАНИЕ
В том случае, когда ингибирование обусловлено связыванием одной молекулы
необратимого ингибитора на молекулу фермента, реакцию можно представить в
следующем виде:
Е -f-1 -k-* Е-I. (8.109)
Если обозначить концентрацию Е-I через z, то уравнение скорости его
образования будет представлять собой уравнение второго порядка
-^-=&(е-z)(i-z).
После интегрирования получим
"=-тД1п4Жг- <8Л1°)
Методы анализа таких уравнений второго порядка рассматривались в гл. 4.
Для упрощения системы обычно считают, что количество ингибитора
значительно превышает количество фермента; тогда получается уравнение
псевдопервого порядка (с. 268), и интегральное уравнение упрощается до
k't - \n(e-г) - \пе (8.111)
где k' - константа скорости псевдопервого порядка, которую
можно определить из наклона графика зависимости In (е-г)
от t.
Выше уже отмечалось, что действие необратимых ингибиторов можно ошибочно
принять за действие неконкурентных ингибиторов; в таких случаях
рассчитанное значение Ki не имеет
Ингибирование и активация ферментов
531
смысла, поскольку отсутствует диссоциация фермент-ингибитор* ного
комплекса. Очевидно, что величина "Ki", рассчитанная для системы с
необратимым ингибитором, будет зависеть от концентрации фермента,
Предыдущая << 1 .. 49 50 51 52 53 54 < 55 > 56 57 58 59 60 61 .. 158 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed