Ферменты 2 - Диксон М.
Скачать (прямая ссылка):
Зависимость длины отрезка от ?
Kt
Ki
Ki
Ki'
Ki
График отклоняется от линейности вниз и достигает предельного значения,
равного Ks'lke
График отклоняется от линейности вниз и достигает предельного значения,
равного 1IV
График отклоняется от линейности вниз и достигает предельного значения,
равного KslV'
График отклоняется от линейности вниз и достигает предельного значения,
равного 1 Ik'e
График отклоняется от линейности вниз и достигает предельного значения
KsKi'lKik'e
График отклоняется от линейности вниз и достигает предельного значения,
равного KilKi'ke
График отклоняется от линейности вниз и достигает предельного значения,
равного 1/'?+зе
504
Глава 8
Рис. 8.3. Графическое определение ингибиторных констант (метод Диксона).
Во всех случаях s2>si.
уравнений (8.6) и (8.23), решенных относительно 1/и. Из уравнения (8.6)
находим для конкурентного ингибирования
Км
Vs
Км i
Fs ' Ki •
(8.58)
Если получить второй ряд экспериментальных точек при другой концентрации
субстрата (S2), то вторая прямая пересечет первую в точке -Кг, как
показано на рис. 8.3, А.
Проверка может быть произведена следующим образом. В точке пересечения
величины 1/и и i должны быть одними и теми же для обоих графиков; так как
ингибирование является конкурентным, то одинаковой должна быть также и
величина V. Поэтому
Км
1
I Км
i
Кг
1 +_*м_ '
I
Ki
(8.59)
или
Н I1 + Ki )-S2 (! + Ki )•
(8.60)
Ингибирование и активация ферментов
505
Уравнение (8.60) может быть справедливо только в том случае, если либо Si
= s2 (что не имеет места в рассматриваемом случае), либо i=-Д,-.
Если Дм уже была определена в отсутствие ингибитора, то в этом случае
опыты в присутствии ингибитора достаточно провести только при одной
концентрации субстрата, так как точка, определяющая Ki, имеет ординату 1
/V, в чем можно убедиться, подставив i=-Ki в уравнение (8.58) (это
значение ординаты указано точкой X на рис. 4.12,В). Таким образом,
необходимо только провести через точку на оси I/о прямую, параллельную
оси абоцисс, как показано на рис. 4.12, В, и она пересечет прямую,
описывающую процесс в присутствии ингибитора, в точке -Ki. Применимость
этого метода, однако, ограничивается, случаями конкурентного
ингибирования.
Наряду с Ki по графику, изображенному на рис. 8.3, В, можно определить и
Дм, так как каждая прямая пересекает ось
Рассматриваемый метод можно применять также и к случаям неконкурентного
ингибирования, как это иллюстрирует рис. 8.3, В. Прямые по-прежнему
пересекаются в точке -Ki, но теперь эта точка лежит на оси абоцисс: В
этом можно убедиться, если в уравнение для случая неконкурентного
ингибирования (8.23) подставить 1/у=0: !
График, описывающий эту зависимость, представляет собой прямую.
Для бесконкурентного ингибирования, характеризующегося уравнением (8.46),
графики зависимости I/о от i при ряде фиксированных концентраций
субстрата образуют серию параллельных прямых (рис. 8.3,Г); их наклон
равен 1/VKu а длины отсекаемых от оси I/о отрезков-(1 + Kia/s)IV.
Следовательно, в данном случае рассматриваемый подход неприменим.
Относительно систем с бесконкурентным ингибированием, которые описываются
уравнением вида (8.48), в работе [647] отмечалось, что графики двойных
обратных величин являются линейными, хотя зависимость 1/у от i имеет вид
и, следовательно, соответствующие графики не являются прямыми; они
отклоняются от линейности вниз, а при i/K'i и i/Ki^l не зависят от i.
Таким образом, этот подход, как и анализ зависимости длин отрезков,
получаемых по методу Лайнуивера-Бэр-ка, от i (см. табл. 8.2), позволяет
сделать выбор между двумя
абсцисс в точке -Д,( + 1 )•
(8.61)
506
Глава 8
Рис. 8.4. Графическое представление системы со смешанным ингибированием.
А и В. Kt<Ki'. Б л Г. Ki>Ki'. Во всех случаях s2>si и п>t2.
рассматриваемыми механизмами бесконкурентного ингибирования.
Для смешанного ингибирования, описываемого схемой (8.30), уравнение
(8.32) можно преобразовать к виду
-Т=-УГ d + W+-f (1 + W). (8.63)
Решая это уравнение при двух разных концентрациях субстрата, мы получим,
что графики зависимости 1/у от i пересекаются при i = Ki (см. рис. 8.4).
В работе [3766] было отмечено, что ордината точки пересечения прямых,
лежащей на оси 1/у, равна (l-Ki/K'i-1/V и что положение этой точки
зависит от соотношения между Кг и К'i |[3766]. Если Ki меньше, чем K'i,
прямые пересекаются в точке, лежащей выше оси i, и, следовательно,
рассматриваемый случай смешанного ингибирования неотличим от
конкурентного; если же Ki больше K'i, прямые пересекаются в точке,
лежащей ниже оси i. Эти два случая приведены на рис. 8.4; очевидно, что
при Ki = K'i имеет место истинно неконкурентное ингибирование.
Поскольку при частичном ингибировании фермент сохраняет некоторую
активность в присутствии избытка ингибитора, графики зависимости 1/у от i
не будут линейными, они будут отклоняться от линейности вниз по
гиперболическому закону, .приближаясь к величине, соответствующей
