Ферменты 2 - Диксон М.
Скачать (прямая ссылка):
отрезков, отсекаемых соответствующими графиками от осей координат в
присутствии и в отсутствие ингибитора. Выражения, определяющие длину
отрезков, отсекаемых от обеих осей при различных типах ингибирования,
могут быть получены из приведенных выше уравнений; для удобства эти
выражения суммированы в табл. 8.1.
При конкурентном ингибировании в отсутствие и в присутствии ингибитора
точки пересечения графиков с осью абсцисс дают 1/Км и 1 /КР
соответственно, где КР=Кк(1 +ii/Ki) -эффективная константа Михаэлиса в
присутствии ингибитора (концентрация г). Таким образом, константа Ki
может быть определена из выражения
Кг-^-------. (8.53)
Хм
При неконкурентном ингибировании точки пересечения графиков с осью
абсциссе дают 1/У и 1/Ур соответственно, где Vp = = VJ(l + i/Ki). Тогда
Ki^-^-. (8.54)
уГ-1
В случае частичного ингибирования выражения для Ki имеют следующий вид:
Kt = j^~ (l--^-) (случай 16)
Ks -1
(8.55)
Kj = _i----^ l-(случай 116),
yP'-1
где V' - скорость в присутствии избытка ингибитора и субстрата, K's -
константа Михаэлиса в присутствии избытка ингибитора. Обе эти величины
должны быть получены независимо друг от друга путем экстраполяции Ур и КР
к i-=+:оо.
Выражения, определяющие длину отрезков, отсекаемых на осях координат при
построении графиков в двойных обратных координатах
<3
гг
з
'о
<3
ь<
+
"л S? /^V
€ 55* ? €
* + ?5 + :*¦ + +
+ С2. +
"о !< *< *<
+
+
&С
ti
ii
5С + -
Э ? с-
5с
+ + +
¦-¦ 09 г< w
5с
+
*
€
+
5с
+
5с
+
^ 5< к &
+ •^Г +
+ + +
Ьс
+
о
я
н Г-1
SB(r)
g.(r)
X
Я О
о 5 я (r) о
0) я
О ffl Я со
3 "• о >* Я •-1
о
я
н
я
(Ur-I Си-ч
>"со я -*
goo
я
од
я
я
<и
я
я
со
а.
>1
о
о
я
ь
ЯГ-1
1) ч
"•23
Я 00
я^:
gp
Я 00
Я 4>
(c) я я я * с" я О) я
О Л
я о* я >> я *-1 ь"
о <и со О
я я
я
я
си
>л
о
о
я
Я Г-1
СО -Ч
4) •
58"
о
4)
о
со со
део а> оо
JS
4)
Sr-T
Н ч Я СО
>:"
я
Я 4,
О м
* я
CU
>т
4)
о
ё" |3 ?" я ^
4"
Е Е >
IV6 - частичное бесконкурент- / (1 + г/Л";) \ 1 (l-fj/Zfj) / /fs
ное [уравнения (8.50) и (А+,/*+Л < ' *+* *" I . , (*+з/*+1)| (8.о1)] U +
jr U+ К------------------------------------------
502
Глава 8
В случаях смешанного полного и частичного ингибирования выражения для Ki
и К' i можно записать в виде
Ks -1 Vp -1
(8.56)
Ki= vlVp v~ (случай Шб).
I Vp-V'J
Для бесконкурентного ингибирования, если выполняется уравнение (8.46), то
<8'67>
Кр ~
если же справедливо уравнение (8.48), то Ki будет определяться выражением
(8.56), т. е.
2. Более точно, однако, Ki можно определить с помощью графиков двойных
обратных величин, построенных для ряда фиксированных концентраций
ингибитора. Если построить зависимость наклонов или длин отрезков для
этих графиков от концентраций ингибитора, то часто удается определить Ki
непосредственно. Результаты, получаемые при построении таких графиков,
приведены в табл. 8.2.
Эти графики позволяют также выявить случаи частичного ингибирования;
гиперболические функции зависимости длин отрезков или наклонов от i,
содержащие член (1 ¦¦+i/K,i)l(\ + ilKi), становятся независимыми от i при
i/Ki и ifK't^l. Бесконкурентное ингибирование, описываемое уравнением
(8.48), также приводит к гиперболической зависимости длин отрезков от i,
и еп> можно, следовательно, отличить от бесконкурентного ингибирования,
описываемого уравнением (8.46). При бесконкурентном1 частичном
ингибировании (8.50) график зависимости наклонов, от i представляет собой
выпуклую кривую, а график зависимости длин отрезков от i имеет минимум.
3. Диксон [ИЮ] предложил простой графический метод, ко-
торый позволяет определять Кг непосредственно. Если опреде-
лять скорость реакции в условиях постоянной концентрации
субстрата и различных концентраций ингибитора, то график за-
висимости 1/и от i будет представлять собой прямую, как пока-
зано на рис. 8.3. В этом можно убедиться: при рассмотрении
Графическое определение ингибиторных констант
горцы:
Таблица 8.2
Ингибирование
График
Длцна отрезка, отсекаемого от оси абсцисс
Линейное ингибирование 1а Полное конкурентное [уравнение (8.6)]
Па Полное неконкурентное [уравнение (8.23)]
Ша Смешанное [уравнение (8.32)]
IVa Бесконкурентное [уравнение (8.46)]
Нелинейное ингибирование
16 Частичное конкурентное [уравнение (8.13)]
116 Частичное неконкурентное [уравнение (8.27)]
Шб Частичное смешанное [уравнение (8.36)]
IVa Бесконкурентное [уравнение (8.48)1
IV6 Бесконкурентное
Зависимость наклона от i
Зависимость длины отрезка, отсекаемого от
вертикальной оси, от i
Зависимость наклона от i
Зависимость длины отрезка, отсекаемого от
вертикальной оси, от ?
Зависимость длины отрезка, отсекаемого от
вертикальной оси, от ?
Зависимость наклона от ?
Зависимость длины отрезка, отсекаемого от вертикальной оси, от ?
Зависимость наклона от ?
Зависимость длины отрезка, отсекаемого от вертикальной оси, от ?
Зависимость наклона от ?
Зависимость длины отрезка от ?
