Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Диксон М. -> "Ферменты 2" -> 42

Ферменты 2 - Диксон М.

Диксон М., Уэбб Э. Ферменты 2 — М.: Мир, 1982. — 515 c.
Скачать (прямая ссылка): fermentit21982.djvu
Предыдущая << 1 .. 36 37 38 39 40 41 < 42 > 43 44 45 46 47 48 .. 158 >> Следующая

фермент окажется связанным с ингибитором. Те же соображения применимы к
кажущейся константе Михаэлиса.
Следует отметить, что в данном случае с помощью простых графических
методов невозможно определить Ки Это объясняется отчасти тем, что при
изменении концентрации субстрата эффективное сродство фермента к
ингибитору изменяется от 1//Ci до 1 IK'i. Связывание фермента с
субстратом должно влиять на сродство фермента к ингибитору в такой же
мере, как связывание фермента с ингибитором влияет на сродство фермента к
субстрату, так как из определений констант равновесия следует, что
<8Л5>
Кроме того, зависимость I/o от i для данного случая не является линейной
в отличие от того, что имеет место при полном конкурентном или
неконкурентном ингибировании.
Поскольку имеет место соотношение (8.15), результирующее уравнение будет
содержать только три константы равновесия из четырех, представленных на
схеме (8.7); поэтому уравнение (8.13) может быть записано в виде
V== Ks (l+i/Ki)' (8Л6^
s (l + i/КП
Очевидно, что при Ki = K'i и, следовательно, при Ks~K's [см. соотношение
(8,15)] ингибирование будет отсутствовать.
Как и в случае неконкурентного ингибирования (с. 489)*. анализ системы
(8.7) в стационарных условиях приводит к уравнению скорости, которое
содержит концентрации ингибитора и субстрата во второй степени, и,
следовательно, к нелинейному графику в двойных обратных координатах.
Неконкурентное ингибирование
Неконкурентные ингибиторы не влияют на связывание субстрата с ферментом,
а изменяют только V. В таком случае имеются две возможности: либо
комплекс EIS совсем не распадается (тип Па) и скорость реакции целиком
определяется.
488
Глава 8
распадом ES (влияние ингибитора эквивалентно влиянию уменьшения
количества активного фермента), либо комплекс EIS распадается со
скоростью, отличной от скорости распада комплекса ES (типа 116), и полная
скорость равна сумме скоростей обеих этих реакций.
Тип На: полное неконкурентное ингибирование. Эта система может быть
представлена схематически в следующем виде:
Если система функционирует в равновесных условиях, то следует оперировать
только двумя константами диссоциации, поскольку по определению связывание
фермента либо с S, либо с I не влияет на его сродство к другому
реактанту. Следовательно,
Следовательно, в присутствии ингибитора величина V уменьшается в (l+i/Ki)
раз, a Ks остается неизменной. Если величина i становится бесконечно
большой, то V стремится к нулю; таким образом, нельзя устранить действие
неконкурентного ингибитора путем увеличения концентрации субстрата. Если
в ходе исследования необратимых ингибиторов зависимость скорос-
(8.17)
1 k+з Ь+5
Таким образом,
(e-x-y-z)s-Ksx,
(e-x-y-z)i=Kty,
ys=Ksz,
xi=Ktz,
v=kx.
(8.18)
(8.19)
(8.20) (8.21) (8.22)
Из этих уравнений находим
ke
v
(8.23)
Ингибирование и активация ферментов
489
ти от концентрации субстрата при различных концентрациях ингибитора
анализируют с помощью графиков двойных обратных величин, то нередко
наблюдается кажущееся неконкурентное ингибирование. Это обусловлено тем,
что результат любого воздействия, который уменьшает только количество
активного фермента в растворе, состоит в уменьшении кажущейся величины V,
константа же /См при этом не изменяется. Можно привести множество
примеров подобного анализа данных по необратимому ингибированию, однако
этот подход является необоснованным, и рассчитанные величины "Ki"
оказываются лишенными смысла.
Анализ системы (8.17) в стационарных условиях приводит к уравнению
следующего вида [501, 1872]:
Оно сходно с уравнением для двухсубстратной реакции, протекающей по
неупорядоченному механизму в стационарных условиях (гл. 4); Ci, ..., Сц -
сложные комбинации констант скорости.
Поскольку в выражении имеются члены, содержащие концентрации субстрата и
ингибитора во второй степени, можно ожидать, что графики двойных обратных
величин будут нелинейными. Поскольку относительная значимость
квадратичных членов зависит от отношений различных констант скорости, при
некоторых условиях вклад этих членов становится незначительным и
уравнение (8.24) упрощается до уравнения вида (8.23). Несколько таких
случаев были детально проанализированы в работах ([501, 1420, 1872].
При постоянной концентрации I уравнение (8.24) может быть представлено в
виде
где a, b, u, v и w - сложные константы, зависящие от i.
Уравнение вида (8.25) приводит к нелинейным графикам двойных обратных
величин, т. е. зависимость v от s не является гиперболической. Типы
кривых, которые получаются для уравнений такого вида, были рассмотрены в
работе [1872]. Фриден )[ 1420] отметил, что при постоянных и относительно
больших i и при достаточно малых s члены уравнения (8.24), содержащие s2,
становятся пренебрежимо малыми и гр зойных
обратных величин, построенный в координатах > окаг
V -
(Сis + C2ss 4- Cssi) е
(8.24)
С4 -j- C6s Cet -j- C7i2 -j- Cssi -f- C9s2 -f- Ci0si2 -f- СцвН *
зывается линейным.
Предыдущая << 1 .. 36 37 38 39 40 41 < 42 > 43 44 45 46 47 48 .. 158 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed