Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
5 мл в колбу № 1, туда же прибавляют 1 мл раствора аскорбиновой кислоты (5 мг) и 19 мл буферного раствора (9 частей фосфата калия+
+ 1 часть фосфата натрия; pH 5,9).
В колбу № 2 вносят 5 мл растительной взвеси, 19 мл буферного раствора и 1 мл воды.
(Кислые вытяжки предварительно нейтрализуют 0,1 N раствором щелочи до pH 5,5—5,9).
В колбу № 3 вносят 1 мл раствора аскорбиновой кислоты, 19 мл буферного раствора и 5 мл воды.
Все три колбы с содержимым хорошо взбалтывают и оставляют в термостате на 30 мин. при 20°, часто их перемешивая. По истечении указанного срока колбы вынимают из термостата, в каждую из них тотчас приливают по 5 мл 2%-ного раствора НС1, перемешивают, отбирают по 0,5—2 мл смеси и титруют 0,00 liV раствором 2,6-ди-хлорфенолиндофенола обычным путем.
В результате имеется возможность определить активность аскорбиназы, если она лежит в пределах до Ю мг дегидроаскорбиновой 1 кислоты, так как в опыт берется 5 мг аскорбиновой кислоты. Если при титровании содержимого колбы № 1 будет обнаружено, что вся аскорбиновая кислота окислена, тогда опыт следует повторить с удвоенным, утроенным (10, 15 мг) количеством аскорбиновой кислоты.
(а-Ь)-к-2
11,4-с ’
где: х —активность аскорбиназы в мг дегидроаскорбиновой кислоты в 1 г исследуемой ткаии (в расчете на 1 час действия фермента), а —количество миллилитров индофенола, пошедшего на титрование 0,5 — 2 мл вытяжки из колбы № 2,
6 —то же, для колбы № 1, к — коэфициент поправки к титру индофенола,
2—коэфициент пересчета действия фермента на 1 час времени,
1!,4 —коэфициент для пересчета индофенола на аскорбиновую кислоту, с — навеска вещества в г, взятого на титрование:
т-п-е
с =----—
п ¦ к ’
где: т — исходная навеска вещества в г, п— 1-е разяедение
р—количество взвеси в мл, взятое в колбу № 1,
А —объем жидкости в колбе № 1 после добавления соляной кислоты, в конце опыта,
е — количество взвеси в мл, взятых из колбы № I на титрование.
Мы лишены возможности привести другие методы определения витамина С, безусловно заслуживающие внимания, как, например, метод Букина для определения аскорбиновой кислоты в растительных объектах, применяемый в на1црх лабораториях (53), метод Мартини и Бонсиньоре с метиловой синью (54), титрование аскорбиновой кислоты иодом в модификации Голяницкого и Брюшковой (55), метод Иосиковой—для определения аскорбиновой кислоты в животных тканях (56)1, гистологический метод Жиру—с азотнокислым серебром (57), упрощенный метод Главного военно-санитарного управления, применяемый в походных условиях (124), тест Роттера—подкожное введение 2,6-дихлорфенолиндофенола для установления степени дефицита в организме аскорбиновой кислоты и др. Отметим лишь, что иногда химические методы определения витамина С все же могут вызывать сомнение в правильности получаемых результатов. В таких случаях, правда, крайне редких, приходится прибегать к помощи биологического определения (на морских свинках). (Литературу* по этому вопросу см. 50, 51).
В настоящее время выпущен ГОСТ № 3715-47 на методы определения витамина С, которым и надлежит руководствоваться в практической работе. В основу ГОСТ положен свинцово-серородо-родный метод, упрощенный способ и иодометрическое определение. В ГОСТ приводятся указания, в каких случаях следует .пользоваться тем или иным способом.
СОДЕРЖАНИЕ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ В РАСТЕНИЯХ И ЕЕ РОЛЬ В ПРОЦЕССЕ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ РАСТИТЕЛЬНОЙ КЛЕТКИ
Во всех растениях (за небольшим исключением)3 содержится аскорбиновая кислота, иногда в весьма значительных количествах, причем в различных органах одного и того же растения содержание ее различно. Как правило, наиболее богаты аскорбиновой кислотой
1 Для определения аскорбиновой кислоты в животных тканях по методу Иосиковой навеску ткани растирают в 0,5%-ном растворе уксуснокислого кальция, обрабатывают 5%-ным раствором уксуснокислой ртути, в дальнейшем поступают, как указано в определении в крови и моче.
2 Вопрос о причинах отсутствия аскорбиновой кислоты в грибах, некоторых водорослях и т. п. является предметом специального исследования. Грибы (высшие и низшие) аскорбиновой кислоты практически не содержат; в них встречаются вещества, лишь «напоминающие аскорбиновую кислоту», Повидимому, таким соединением может служить карнозиковая кислота, содержащая моноэнол и титруемая индофенолом. В этой связи сообщение Кезели и Джапаридзе (117— 119) об обнаружении ими в грибах аскорбиновой кислоты выдвигает вопрос
о необходимости дальнейшего изучения природы редуцирующих веществ некоторых грибов.
листья и лоды, значительно меньше ее в стеблях и очень мало в корнях (исключение составляют некоторые корнеплоды).
Работами Иванова, Лаврова, Шмидта с сотр., Шуберт (58—67) и др. была показана исключительно высокая С-витаминная активность шиповника и одновременно установлены большие колебания в содержании в нем витамина в зависимости от сорта и района произрастания. Так, например, как правило, шиповники южного происхождения беднее аскорбиновой кислотой, чем северные и произрастающие в горах; шиповники с светлыми плодами зачастую активнее шиповников с темными плодами, и т. п.
