Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
Расчет содержания аскорбиновой кислоты производят по следующей формуле:
п • k-v ¦ 0,088 • 100 X = ————-————— а • с
Обозначения те же, что и в предыдущей формуле.
Примечание. Букин рекомендует иодометрический метод для определения витамина С в хвойных настоях.
III. Определение витамина С в сульфитированных продуктах
Определение витамина С в продуктах, подвергавшихся сульфитации, имеет свои особенности, заключающиеся в необходимости удаления из испытуемых вытяжек S02. Витаминным институтом разработан следующий метод определения (123).
Навеску сульфитированного продукта (в зависимости от активности) тщательно измельчают в ступке с кварцевым песком и кислотой (если дальнейшее определение витаминной активности будет проводиться по методу Тильманса, применяют 2%-ную НС1; при определении по Девятнину и Иосиковой применяют 5%-ную СН3СООН). Общее количество кислоты, применяемой для этой цели, должно находиться в отношении 1:10 или 1 : 25. Полученную вытяжку количественно переносят в колбу, снабженную пробкой с двумя отверстиями: через одно из них проходит опущенная в жидкость трубка, соединенная при помощи каучука с источником С02 (аппарат Киппа или баллон). На стенке колбы делают отметку, равную соответствующему объему вытяжки в колбе, через систему пропускают слабый ток углекислоты и одновременно нагревают содержимое колбы до кипения, время от времени взбалтывая. По прошествии 3 — 5 мин. кипячения из колбы отбирают пробу жидкости для определения наличия в ней S02. В случае положительной реакции кипячение продолжают еще несколько минут и вновь пробу жидкости испытывают на S02. При отсутствии S02 систему разъединяют, содержимое колбы охлаждают струей водопроводной воды, вытяжку в колбе приводят при помощи соответствующей кислоты к исходному объему и в дальнейшем поступают так, как описано при определении содержания витамина С.
Качественная реакция на S02. Исследуемую кислую вытяжку нейтрализуют по лакмусу 10%-ным раствором NaOH.
На фарфоровую пластинку (или крышку от тигля) помещают 5 капель нейтрализованной жидкости и прибавляют 1 каплю водного раствора малахит-грюн (концентрация 1 : 2000). В присутствии S02 голубая окраска смеси быстро исчезает1.
IV. Определение аскорбиновой кислоты в моче
\
К 10 мл мочи добавляют 1 мл конц. уксусной кислоты и 100 мл дестиллированной воды. Титруют из микробюретки 0,001 N раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления не исчезающего в течение полминуты розового окрашивания. Необходимо, чтобы все определение заканчивалось в течение не более 1 мин. (Поправка на цветность обычно составляет 0,7—0,8 мл).
V. Определение аскорбиновой кислоты в крови и моче, по Девятнину
и Иосиковой (52)
4 мл крови или мочи вносят в широкую центрифужную пробирку, приливают 8 мл 0,5%-ного раствора уксуснокислого кальция и при помешивании стеклянной палочкой добавляют 4 мл 25%-ного раствора уксуснокислой ртути. Содержимое пробирки тщательно размешивают до получения однородной массы, центрифугируют
5 мин. (мочу отфильтровывают через складчатый фильтр), центри-фугат (или фильтрат) обрабатывают в течение 5 минут сероводородом для восстановления окисленной под влиянием солей ртути аскорбиновой кислоты и удаления избытка ртути. Фильтруют, сероводород удаляют пропусканием С02 и полученную вытяжку целиком титруют
из микробюретки раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до
появления устойчивого бледнорозового окрашивания.
Vi. Определение аскорбиновой кислоты в плазме крови
К 5 мл крови прибавляют оксалат или цитрат натрия и тотчас центрифугируют для отделения плазмы. 2 мл плазмы переносят в центрифужную пробирку, прибавляют 4 мл дестиллированной воды и 2 мл 5%-ного раствора вольфрамовокислого натрия. Тщательно размешивают, добавляют 2 мл l/3 N раствора серной кислоты, вновь перемешивают, дают отстояться в течение 1—2 мин. и центрифугируют. 2 мл центрифугата титруют из микробюретки 0,001 N раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розового окрашивания.
1 Леви(121) к слегка подкисленному экстракту сульфитированных пло-
дов и овощей добавляет эквивалентный объем 3%-ного раствора Н202 и титрует вытяжку обычным способом. По ряду причин затруднительно дать положительную оценку этого метода. Сисакян (122) титрует вытяжку продукта после предварительного ее кипячения для удаления SOt.
VII. Определение аскорбиназы в растительных продуктах
В основе метода лежит принцип определения аскорбиназы, предложенный Букиным и видоизмененный Девятниным и Грунт. Метод приводится в том виде, как он описан в соответствующих инструкциях (123).
Для определения подготовляют 3 колбы на 50 мл (№ 1, 2 и 3) и нейтрализованный до pH 5,5—5,9 раствор кристаллической аскорбиновой кислоты (5 мг кислоты в 1 мл раствора).
Навеску испытуемого материала (5—25 г) тщательно растирают в ступке с небольшим количеством воды. Полученную взвесь переводят в мерный цилиндрик и доводят до объема (25—50 мл) водой. Из полученной взвеси после тщательного перемешивания отбирают
