Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
Повидимому, стабилизирующее действие некоторых других веществ также можно усматривать в блокировке активных групп окислительных ферментов.
Стабилизация аскорбиновой кислоты сахарозой имеет иной механизм действия: стабилизация в щелочной среде обусловлена выключением действия меди вследствие образования медных сахаратов; стабилизация аскорбиновой кислоты в кислой среде обусловливается повышением вязкости раствора (при концентрированных сахарных растворах), вследствие чего значительно уменьшается скорость диффузии кислорода из воздуха.
1 инт. ед. витамина С равна 0,05 мг кристаллической аскорбиновой кислоты; 1 биологическая единица (единица морской свинки, или ME) равна 1 мг.
МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Из громадного числа предложенных в разное время химических методов определения витамина С наиболее достоверным является определение витамина при помощи титрования раствором 2,6-дихлор-фенолиндофенола. Однако в том виде, как он предложен Тильман-сом (41), метод этот не может быть применен для точных определений. Дело в том, что многие вещества, находящиеся в естественных продуктах (глютатион, цистеин, танниды, некоторые углеводы и соли и т. п.), так же восстанавливают 2,6-дихлорфенолиндофе-нол, как и аскорбиновая кислота. Поэтому нужны определенные условия, исключающие влияние этих веществ, чтобы результаты титрования совпали с истинным содержанием витамина С в испытуемом объекте. Многими авторами и учреждениями в свое время были предприняты попытки таким образом модифицировать метод Тильманса, чтобы он давал результаты, наиболее близко совпадающие с данными биологического определения (на морских свинках).
В течение ряда лет Государственной контрольной витаминной станцией и Всесоюзным витаминным институтом производились проверка и уточнение отдельных прописей методик, в результате чего выявилась возможность рекомендовать несколько методов, доступных для ряда лабораторий и наиболее точно характеризующих витаминную активность исследуемого материала (39, 40, 42—49).
1. Определение аскорбиновой кислоты в растительных продуктах
Навеску исследуемого материала (2—10 г) тщательно растирают в ступке со стеклянным порошком или кварцевым песком и 5%-ным раствором уксусной кислоты (не менее чем трехкратное количество). Полученную массу быстро фильтруют через марлю или вату или центрифугируют.
К 10 мл фильтрата или центрифугата добавляют 0,4 г СаС03 и по окончании реакции нейтрализации приливают 5 мл 5%-ного
раствора уксуснокислого свинца (приготовленного на 5%-ной уксусной кислоте) и фильтруют или центрифугируют.
К 1—10 мл фильтрата или центрифугата добавляют 1/2 объема концентрированной уксусной кислоты (70—80%) и титруют 0,001 N раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления неисчезающего розового окрашивания.
Примечание. Государственная контрольная витаминная станция Министерства здравоохранения СССР рекомендует перед титрованием добавлять к фильтрату 1 мл 2%-нОй соляной кислоты и доводить объем титруемой БЫТЯЖКИ водой до 15 мл.
Расчет содержания аскорбиновой кислоты производят по следующей формуле:
_ п ¦ к ¦ v • • 0,088 • 100
где: X — содержание аскорбиновой кислоты, мг%,
« — количество миллилитров индофенола, пошедшее на титрование, за вычетом поправки на цветность,
К —поправка к титру 0,001 N раствора индофенола, в —объем, до которого доведена взятая навеска,
Vj — объем вытяжки после осаждения свинцом,
0,088 —количество миллиграммов аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл точного 0,001 N раствора индофенола, а —навеска исследуемого материала в г, взятая для определения,
Ь — количество миллилитров вытяжки, взятое для осаждения свинцом, с —количество миллилитров вытяжки, взятое для титрования.
В случае наличия в исследуемом веществе окисленной формы аскорбиновой кислоты или в случае анализа интенсивно окрашенных продуктов или подвергавшихся технологической обработке фильтрат после осаждения уксуснокислым свинцом обрабатывают в течение 5—10 мин. током сероводорода, выпавший осадок PbS отфильтровывают и фильтрат обрабатывают углекислотой для удаления избытка сероводорода, после чего вытяжку титруют, как указано выше.
Расчет содержания общего количества аскорбиновой кислоты производят так Же, как и расчет восстановленной аскорбиновой кислоты; вычитая из общего количества аскорбиновой кислоты количество восстановленной, определяют количество окисленной формы аскорбиновой кислоты.
При анализе продуктов, богатых дубильными веществами (чай), крахмалом (картофель), и мучных изделий обработку вытяжек производят 25%-ным раствором уксуснокислого свинца До полноты осаждения; в дальнейшем поступают, как описано выше.
II. Упрощенный метод определения аскорбинбвой кислоты в хвое, шиповнике, настоях из хвои и листьев древесных пород, экстрактах и концентратах шиповника, драже и таблетках и т. п.
Навеску исследуемого материала (1—10 г) тщательно растирают в ступке со стеклянным порошком и 2%-ной НС1, переносят в мерную колбу емкостью 50—100 мл, объем доводят до метки 2%-ной НС1, фильтруют и 1 —10 мл фильтрата титруют 0,00\N раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления неисчезающего в течение полминуты розового окрашивания.
