Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Девятин В.А. -> "Витамины " -> 48

Витамины - Девятин В.А.

Девятин В.А. Витамины — М.: Пищепроиздат, 1948. — 282 c.
Скачать (прямая ссылка): vitamini1948.djvu
Предыдущая << 1 .. 42 43 44 45 46 47 < 48 > 49 50 51 52 53 54 .. 137 >> Следующая

При этом образуется 1,2-диметил-4,5-диаминобензол:
который, в отличие от других диаминобензолов, дающих коричневое окрашивание, образует голубой раствор. Вместо радикала рибозы в состав витамина В2 может быть введен радикал ксилозы, арабинозы,
рамнозы, но все эти соединения значительно 'уступают рибофлавину в силе своего биологического действия или вовсе таковым не обладают.
Некоторые гомологи флавина не только не являются физиологически активными соединениями, но обладают прямо противоположным, «антивитаминным» действием. Так, галактофлавин подавляет рост крыс; находящихся на В2-авитаминозной диэте, и вызывает у них симптомЫ| характерные для В^авитаминоза-
сн2он носн неон
I
неон носн
N
1 г рибофлавина соответствует 400 ООО и. е. За 1 и. е. условно принимают 2—3,5 у,рибофлавина.
ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
РИБОФЛАВИНА
Современные методы химического определения рибофлавина основаны либо на определении интенсивности флуоресценции, самого рибофлавина или люмифлавина, получаемого при щелочном фотолизе рибофлавина, либо на непосредственном колориметрировании желтых растворов флавина. Первый способ является более точным; второй, менее точный, применим лишь к хорошо очищенным от посторонних пигментов вытяжкам.
1. Метод люмифлавиновый с изменениями, внесенными ВНИВИ(4). Навеску исследуемого материала, в зависимости от активности—2—5 г, заливают 10-кратным количеством 75 %-ного метанола и оставляют на автолиз в темноте при 35—37° на 20—30 час., время от времени перемешивая. Смесь фильтруют, фильтрат обрабатывают в делительной воронке 2—3 раза хлороформом1;
1 Количество хлороформа, используемого для этой операции, составляет от 5 до 15 мл.
хлороформ выбрасывают, а водно-метиловый раствор упаривают при 60° до удаления метанола; водный остаток переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки водой. Из этого раствора отбирают в низкий широкий бюкс 4мл,прибавляют 1 мл Ю%-ного раствора NaOH и сильно щелочной раствор освещают в течение 1 часа электрической лампой мощностью 500—800 ватт, устанавливая бюкс на расстоянии 0,5 м от лампы. Раствор необходимо перемешивать и следить за его температурой, которая не должна быть выше 15—17°. Бюкс помещают в кристаллизатор с холодной водой, если нужно, охлаждаемой кусочками льда. По прошествии часа раствор люмифлавина подкисляют до слабокислой реакции 20%-ный уксусной кислотой и обрабатывают в делительной воронке хлороформом. Люмифлавин переходит в хлороформ, придавая ему интенсивную зеленую флуоресценцию, степень которой измеряется или визуально в ультрафиолетовом свете ртутно-кварцевой лампы, или флуорометром.
Расчет содержания рибофлавина производят по следующей формуле:
де: X — содержание рибофлавина в у на 1 г,
у —объём, до которого доведена взятая навеска,
Ь —количество f люмифлавина н испытуемой вытяжке, соответствующее стандартной шкале, а — навеска исследуемого вещества в г, с —количество миллилитров вытяжки, взятой для фотолиза.
Приготовление стандартной шкалы рибофлавина. 10 мг кристаллического рибофлавина растворяют в 25 мл воды. Раствор хранят в темноте; устойчив в течение 4 месяцев
(раствор I). Из первого раствора берут 2,5 мл (1000 у рибофлавина)
в мерную колбу на 100 мл и доводят водой до метки (раствор II).
В десять широких бюксов вносят по 1 мл 10 %-ного раствора NaOH и следующие количества раствора II: 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0 6;
0,7; 0,8; 0,9; 1,0 мл, что соответствует 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8, 9, 10 у рибофлавина. Объем жидкости в бюксах доводят водой до 5 мл и подвергают фотолизу при 15—17° в течение 1 часа светом лампы
500—800 ватт, на расстоянии 0,5 м от лампы. Затем растворы под-
кисляют 20%-ной уксусной кислотой до слабокислой реакции на лакмус.
Пробу из бюксов переносят в делительные воронки и обрабатывают тем же количеством хлороформа, которое было использовано для извлечения люмифлавина в исследуемом растворе.
Хлороформенные растворы профильтровывают в ряд пробирок одинакового диаметра из бесцветного стекла. Пробирки закрывают пробками и хранят в темном месте. Шкала устойчива в течение
1 месяца-
В целях дальнейшего улучшения метода вводится дополнительно адсорбция рибофлавина на флоридзине, на фуллеровой земле или на асканите.
При определении флавина в молоке применяется этот же метод, с дополнительным осаждением белков молока трихлоруксусной кислотой.
Есть, однако, основание полагать, что люмифлавиновый метод определения рибофлавина дает значительные потери витамина В2. В этом отношении особого внимания заслуживает фЛуорометри-ческий метод Рубина, основанный на гашении флуоресценции гидросульфитом натрия в присутствии хлористого олова (5)1.
2. Метод Эккелен и Эммери (определение в и т а м и н а В2 в моче). К 100 мл мочи прибавляют раствор уксуснокислого свинца и обрабатывают H2S до полного выпадения свинца в осадок, основательно встряхивают и отфильтровывают на бюхнеровской воронке. Из адсорбата флавин извлекают' смесью воды + ], 8 % пиридина+0 2% ледяной СН3СООН, элюат помещают перед отверстием камеры, заключающей ртутно-кварцевую лампу, и в ультрафиолетовом свете измеряют флуоресценцию со стандартным раствором флавина.
Предыдущая << 1 .. 42 43 44 45 46 47 < 48 > 49 50 51 52 53 54 .. 137 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed