Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
v—общий объем раствора, поступившего для колориметрирова-ния, в мл;
G—навеска испытуемого образца, в г.
2. Определение каротина в сухом растительном материале
(по инструкции Государственной контрольной витаминной станции Министерства здравоохранения СССР)
При исследовании сухого материала (сухие овощи, плоды, травы и пр.) извлечение каротина производят непосредственно бензином или петролейным эфиром. В дальнейшем поступают, как описано выше.
3. Определение каротина в жирах и маслах
(по инструкции Государственной контрольной витаминной станции Министерства здравоохранения СССР)
К навеске жира или масла в количестве 0,5—2 г прибавляют 20' мл 5;%-ного спиртового раствора щелочи, омыляют при 80° в течение 30 минут, в дальнейшем поступают так, как описано ранее.
4. Упрощенный метод определения каротина
в кормах
Вышеописанное не исчерпывает, конечно, разнообразия применяемых методов определения каротина и приведено нами лишь в качестве примера. В ряде случаев, если не требуется большой точности анализа, могут быть использованы упрощенные методы.
В качестве такого опишем способ определения каротина в кормах, разработанный Попандопулло во Всесоюзном научно-исследовательском институте животноводства.
Приготовляют прибор, состоящий из трубки Аллина, которая вставляется через пробку в колбу или склянку. В узкую часть трубки помещают кусочек гигроскопической ваты, а поверх нее адсорбент (см. ниже) слоем около 1,5—2 см.
Навеску средней пробы исследуемого продукта (5—10 г) переносят в ступку и тщательно растирают с промытым и прокаленным кварцевым песком {около Юг), а для влажных объектов—с добавлением безводного сернокислого натрия (5—10 г). Прибавив в ступку около 5 г окиси алюминия (или окиси магния, или углекислого магния), смесь снова растирают и количественно переносят в колонку
3 Витамины
33
прибора. После переноса смеси в колонку в нее наливают столько бензина (точка кипения не выше 120°), чтобы при промывании колонки поверх смеси постоянно находился слой бензина. Через несколько минут из колонки начинает вытекать желто окрашенный раствор. Промывку колонки бензином продолжают до„ обесцвечивания стекающих из колонки капель.
Для проверки полноты извлечения каротина из исследуемого объекта переливают первый экстракт в мерный цилиндр и продолжают дальнейшее извлечение каротина из колонки чистым бензином. Если новый экстракт не показывает желтой окраски, то нет необходимости добавлять его к первому экстракту, чтобы избежать разбавления уже полученного раствора каротина. В противном случае объединяют оба экстракта и, измерив объем, колориметри-руют, сравнивая окраску со стандартным раствором азобензола aha бихромата калия.
5. Микрометод определения суммы каротиноидов в моркови
(составлен ВНИВИ на основании метода, разработанного для крови Раневским)
Навеску моркови в количестве 0,1—1 г, взятую на техно-хими-ческих весах, тщательно растирают в ступке с кварцевым песком (или стеклянным порошком) и с 1 мл 10%-ного спиртового раствора щелочи.
Содержимое ступки переносят в пробирку с притертой пробкой, ступку и пестик смывают спиртом, промывную жидкость сливают в ту же пробирку. Общее количество жидкости должно составить 10—15 мл.
В пробирку прибавляют 5 мл петролейного эфира или легко кипящего бензина (темп. кип. 40°), смесь тщательно перемешивают стеклянной палочкой. (Петролейный эфир смешивается со спиртом и извлекает из него растворенные пигменты).
Для отделения петролейного эфира от смеси в пробирку прибавляют несколько капель воды, по каплям, и смешивают перевертыванием пробирки. Петролейно-эфирный слой всплывает наверх и обычно бывает интенсивно окрашен.
Из этого слоя осторожно отбирают 0,1 мл в другую пробирку и разбавляют петролейным эфиром так, чтобы раствор петролейного эфира имел лишь слегка желтый оттенок (обычно разводят в 10—100 раз).
Из разбавленного раствора отбирают при помощи пипетки 1 мл и наносят по каплям на белую фарфоровую крышечку от тигля или , на другую белую фарфоровую поверхность по одной капле в одно и то же место, до появления заметного желтого кольца.
Капля экстракта петролейного эфира при высыхании расползается равномерно во все стороны и, увлекая за собой растворенные в ней пигменты, образует кольцо диаметром 2—2,5 см,
В целях уменьшения ошибки петролейно-эфирного экстракта для появления заметного кольца должно пойти около 0,2—0,3 мл.
Расчет содержания каротиноидов в моркови производят при помощи следующей формулы:
5-0,04-100 а - 1000- Ъ С>
где: х —сумма каротиноидов в мг%;
а—навеска в г;
Ь— количество миллилитров петролейно-эфирного экстракта, пошедшее на образование кольца;
С—разведение;
0,04—количество' у-каротина, дающее желтое кольцо;
5—количество миллилитров петролейного эфира, взятое для извлечения каротиноидов.
В заключение настоящего раздела укажем, что за последнее время в практике наших лабораторий все большее распространение получил спектрофотометрический метод определения каротина, исключающий возможность всяких ошибок и дающий цифры абсолютного значения; однако необходимость в сложнейшей и очень дорогой аппаратуре и, кроме того, сложность самой техники определения ограничивают возможность широкого применения в лабораториях и на предприятиях этого метода- При спектрофотометрическом определении длительное освещение испытуемого раствора ведет к разрушению в нем витамина. Поэтому техника определения усовершенствована таким образом, чтобы, максимально сокращая продолжительность экспозиции, по возможности устранить этот единственный источник ошибок. Строгим требованиям прецизионных измерений удовлетворяет каротинометр системы Шипалова—фотоэлектрический прибор, разработанный в Биохимическом институте Академии наук СССР. Действие каротинометра системы Шипалова основано на измерении поглощения света в сравнительно узком монохроматическом участке спектра. Весь процесс измерения занимает не более ] минуты.
