Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
Ниже мы излагаем методы анализа витамина А, составленные на основе работ Всесоюзного витаминного института, Государственной контрольной витаминной станции и Др. и принятые в настоящее время в витаминной промышленности.
Навеска испытуемого вещества варьирует в следующих пределах: драже с витамином А—5—10 г, печеночные рыбьи жиры—0,1—1 г, яйца (только желток) используют целиком, витаминизированный маргарин—20 г, витаминизированное мороженое—100 г, концентраты витамина А—взвешивают 1 каплю, животные ткани и органы—3 г.
Навеску вещества подвергают омылению при помощи раствора щелочи, при этом употребляют для печеночных рыбьих жиров 10 мл 0,5 N спиртового раствора КОН, для яиц—двойной объем (к весу желтка) воды и 45 %-ный водный раствор КОН в отношении 1,5:1 (к смеси), для маргарина—10мл45%-ного водного раствора КОН и 25 мл 96 %-ного этилового спи рта,для мороженого (и молока)—10 мл 45 %-ного водного раствора КОН, для животных тканей и органов— 1мл 45 %-ного водного раствора КОН и 10—12 мл 96%-ного этилового спирта.
(Драже с витамином А и витаминизированные изделия предварительно экстрагируют хлороформом для извлечения витамина А* хлороформ отгоняют, остаток дальше подвергают омылению. Концентраты витамина А омылению не подвергают).
По окончании омыления, которое продолжается от 20 минут до
1 часа, в зависимости от объекта, из смеси извлекают неомыляемую фракцию серным эфиром в три-четыре порции (по 50—100 мл), соединенные эфирные вытяжки отмывают водой, высушивают безводным сернокислым натром, растворитель нацело удаляют упариванием в токе углекислоты, остаток растворяют в хлороформе, с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержалось от 10 до 40 и. е. витамина А.
Реакцию осуществляют следующим образом: к 0,2 мл хлороформенного испытуемого раствора добавляют 1 каплю уксусного ангидрида и 2 мл хлороформенного раствора трихлористой сурьмы. Образующуюся синюю окраску немедленно сравнивают с подходящей по цветности пробиркой стандартной шкалы или в штуфенфото-метре, фотоколориметре, тинтометре Ловибонда и т. д.
При визуальном способе определения наиболее точные результаты получаются в том случае, если окраска реакции по интенсивности укладывается в пределах 4—10-й пробирок.
Приготовление шкалы пробирок-эталонов производится следующим образом: 75 г химически чистой сернокислой меди и 3,5 г Химически чистого азотнокислого кобальта растворяют в 500 мл воды. Полученный раствор разбавляют водой, как указано ниже.
Реакция витамина А с трихлористой сурьмой протекает быстро, достигая максимума приблизительно через 10 секунд; при низких температурах (0—Г) реакция более устойчива; яркий (дневной или искусственный) свет заметным образом влияет на быстроту выцветаемости.
При работе с образцами, содержащими наряду с витамином также каротин (образующий с трихлористой сурьмой зелено-голубое окрашивание), удобно пользоваться тинтометром Ловибонда,
Приготовление шкалы синих единиц
№ Количество Число синих единиц
Основного раствора Воды (мл)
(мл)
1 Основной раствор 0,0 9,2
2 20 0,4 9,0
3 20 1,6 8,5
4 20 3,0 8,0
5 20 4,5 7,5
6 20 6,3 7,0
7 20 8,7 6,5
8 20 11,6 6,0
9 20 14,6 5,5
10 20 19,0 5,0
11 20 24,4 4,5
12 20 31,6 4,0
13 20 41,2 3,5
14 20 55,4 3,0
15 20 74,2 2,5
16 20 104,2 2,0
подбирая подходящие по окраске желтые и зеленые стекла, в целях уравнивания цветности. Эти дополнительные стекла в дальнейших расчетах во внимание не принимаются.
Формулы для расчета:
где: х—содержание витамина А в мг% в испытуемом образце, с—число синих единиц стандартной шкалы, соответствующее по интенсивности окраске реакции с испытуемым раствором, -о—разведение, а—навеска вещества, в г,
4—постоянный коэфициент;
где: хх—содержание витамина А в и. е. на 1 г продукта, х—см. выше,
10—коэфициент пересчета из мг°/0 в гаммы,
0,3—коэфицент пересчета в и. е.
Собель и Вербин (24) в 1947 году предложили новую цветную реакцию на витамин А. Авторы нашли, что хлорзамещенный в 1 и 3 положении глицерин (глицерин- 1,3-дихлоргидрин) дает с витамином А стойкое голубоватое окрашивание. Реакция осуществляется следующим образом: к 1 мл хлороформенного раствора
испытуемого образца жира, содержащего витамин А, добавляют 0,5—1 мл концентрированной соляной кислоты или уксусного ангидрида и 4 мл дихлоргидрина. Смесь оставляют на теплой водяной бане (25°) на несколько минут, образующуюся окраску колориметрируют с подходящим стандартом.
