Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
Далее гальванометр отключают и вынимают пробирку. Во время всей процедуры указатель на барабане должен стоять на нуле.
Из второй (2) пробирки реактив сливают обратно в склянку. В отдельную сухую чистую пробирку наливают пробу витаминного раствора (0,2 мл, как указано выше) и прибавляют 5 мл реактива. В тот же момент опрокидывают песочные часы (на 1 мин.). Смесь переливают в пустую пробирку и ставят в левое гнездо витадеметра. Включают гальванометр; затем, повертывая винт барабана, подводят зайчик к нулю таким образом, чтобы к концу одной минуты он находился в непосредственной близости от нуля (тогда точная установка его на нуль ровно через 1 мин. происходит без всякого труда). Записывают цифру, стояШую под указателем барабана, выключают гальванометр, устанавливают барабан в исходное положение (указатель на нуле),вынимают пробирку из гнезда, взамен ее помещают снова третью пробирку с реактивом, включают гальванометр и отмечают положение «зайчика». Если оно не изменилось (сравнить с записанным ранее для этой пробирки), определение закончено. Если же положение «зайчика» изменилось, нужно повторить определение с новой порцией раствора и реактива. Целесообразно оставлять третью пробирку в витадеметре до того момента, когда нужно производить отсчет по второй пробирке. Во время работы нужно систематически проверять нулевую точку гальванометра. При нарушении ее шкала устанавливается снова таким образом, чтобы «зайчик» совпадал с нулем, а вращением винта диафрагмы после установления в витадеметре пробирки 3 он приводится в положение, записанное для этой пробирки ранее.
Цифры, стоящие под барабаном витадеметра, являются разностью между 100 и D (пропускаемостью раствора в процентах). Следовательно, D равно 100 минус показание барабана.
По специальной таблице легко определяется экстинкция раствора (Е).
Если калибровочная кривая получена на чистом препарате витамина D (кальциферол), то экстинкцию раствора уменьшают на величину, соответствующую Е масла или бензола, промеренных в тех же условиях разведения.
После введения соответствующей поправки по калибровочной кривой находят содержание витамина D, соответствующее данной экстинкции.
Затем производят перерасчет содержания витамина D на исходный раствор.
Например, экстинкция промеренной пробы после введения поправки равна 0,400. По кривой это соответствует, допустим, 420 инт. ед. витамина D. При разведении 1 : 10 это означает, что 0,2 мл исходного раствора содержит 4200 инт. ед., а 1 мл=21 000 и. е. витамина D (или принимая, что 1 y=40 и. е., он содержит 325 ¦(•)•
Собель и Майер, предложившие глиЦерол-1,3-ди-хлоргидрин как реактив на витамин А, позднее нашли, что этот же реактив дает достаточно хорошие результаты при определении витаминов D2 и D3.
Для проведения реакции смешивают 1 мл испытуемого хлороформенного раствора витамина D с 0,5 мл конц. НС1 и. 4 мл дихлоргидрина. Через некоторое время образуется зеленое окрашивание, интенсивность которого определяют в фотоэлектроколори-метре (21).
Шальтеггер (22) предложил новый количественный метод определения витамина D, заключающийся в том, что витамин с ароматическими альдегидами в присутствии перхлорной кислоты дает окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству витамина D.
Реакция выполняется следующим образом: 1 мл бензольного испытуемого раствора витамина D смешивают с 1 мл 0,1%-ного раствора альдегида (ванилина, фурфурола, анисового альдегида или 4-окси-1-нафтальдегида) в бензоле, нагревают до кипения и добавляют 2 капли перхлорного реактива. Последний приготовляют путем смешивания 2 мл уксусного альдегида и 2,5 мл ледяной уксусной кислоты с 0,5 мл 70%-ного раствора перхлорной кислоты с последующим нагреванием смеси в течение 30 мин. при 95—100°.
После добавления перхлорного реактива смесь кипятят еще
1 мин. и оставляют охлаждаться до комнатной температуры. К мутнозеленому раствору добавляют 1,5 мл ледяной уксусной кислоты и окраску раствора измеряют в фотометре с фильтром S66.
Все описанные методы имеют лишь ориентировочную ценность. Следует признать, что на сегодня наиболее правильные данные по определению витамина D можно получить лишь при помощи биологического метода определения (на крысах). Подробно об этом см. соответствующую литературу (20).
РАСПРОСТРАНЕНИЕ ПРОВИТАМИНА D И ВИТАМИНА D в РАСТИТЕЛЬНОМ МИРЕ
В растениях витамина D не обнаружено; в них присутствуют его провитамины—стеролы. Стеролы находят во всех растениях и во всех частях их. Они, как структурные элементы, входят в состав растительной клетки. Приводим краткие данные (8) о содержании стеролов в растениях (в %):
Масло брэмелии
0,6
» винограда дикого ...................
» глицинии ........................ .
» из кожуры древесных семян . .
. 0,12 . 0,7
. 5,0
.Масло кокоса.............................. 0.09
красной смородины . ............. 1,58
крыжовника......................... 0,7
