Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Девис Р. -> "Генетика бактерий " -> 60

Генетика бактерий - Девис Р.

Девис Р., Ботстайн Д., Рот Дж. Генетика бактерий — М.: Мир, 1984. — 176 c.
Скачать (прямая ссылка): genetikabakteriy1984.djv
Предыдущая << 1 .. 54 55 56 57 58 59 < 60 > 61 62 .. 63 >> Следующая

прозрачные бляшки.
9. Рестрикционные карты
161
Приложение 9
Рестрикционные карты
I. Карты фага А, и векторов, образуемых на основе фага Я
Ранее были описаны некоторые из векторов, образованных на основе фага Я,
которые были использованы для клонирования чужеродной ДНК и оказались
очень удобными. На основе фага Я сконструировано много векторов. Однако
большинство из них либо не было использовано для клонирования чужеродной
ДНК, либо было сконструировано не самым оптимальным образом.
На рис. 1 приведена карта генома фага Я, на которой указаны координаты (в
долях от длины генома Я+) многих фаговых генов. Под картой приведены
некоторые делеции и замещения. Изменение размера ДНК фага Я с делецией
или замещением (в kb) приводится под названием затронутой области
(например, область иммунности i21 на 2,45 kb короче замененной области у
фага Я+). Под линией, изображающей замещение, указан размер этой не
принадлежащей фагу Я последовательности (в kb). Приведены также
координаты концов делеций и замещений на карте фага Я.
На рис. 2 и 3 показаны сайты расщепления ДНК фага Я рестриктирующими
эндонуклеазами. Координаты этих сайтов определили Филипсен и Девис
(Philipsen, Davis, готовится к печати) методами электронной микроскопии и
электрофореза в агарозном геле, при помощи которых были получены
сравнительные данные о длинах и подвижностях фрагментов ДНК фага Я и
фрагментов ДНК фХ174. Результаты, полученные методами электронной
микроскопии и электрофореза, очень хорошо согласуются для всех
фрагментов, за исключением тех, которые находятся вблизи координаты 0,85.
Длины фрагментов из этой области, определенные с помощью электронного
микроскопа, несколько превосходили те длины, которые были установлены по
электрофоретической подвижности. Данные, представленные на карте,
получены при усреднении результатов этих двух определений. Приведенная
карта учитывает также и результаты работы Дэниелса с сотрудниками
(Daniels et al., 1980). Полученные ими результаты не очень расходятся с
нашими определениями. Длина ДНК фага Я+ определена равной 49,0 kb. Цифры
над черточками указывают размеры соответствующих фрагментов (в kb). Цифры
под черточками обозначают координаты сайтов рестрикции в долях длины ДНК
Я+.
На рис. 4-14 ДНК векторов Я перекрестно заштрихованы. Делеции обозначены
тонкими линиями, над которыми приведе-
162
Раздел III. Приложения
ны их названия. Те последовательности, которые происходят не из фага Я,
заполнены точками и нарисованы выше основной линии ДНК Я (например,
область иммунности фага 21 на рис. 9 или фрагмент ДНК фага <р80 на рис.
10). На рис. 11 и 12 в правом плече показан также маленький кусочек ДНК
фага <р80. Его присутствие удаляет сайт HindllI из ДНК фага Я. Те
последовательности, которые имеются в векторе, но обычно отсутствуют в
гибридах (т. е. замещаемые области векторов замещения), обозначены
заполненными точками прямоугольниками, расположенными выше линии ДНК фага
Я. Под линиями ДНК фага Я приведены координаты разрывов в
последовательности ДНК фага Я. Над линиями ДНК указаны длины сегментов в
kb. Указаны также полные длины левого и'правого плеча в kb..
Литература
Daniels D. L., de Wet I. R., Blattner F. R.. 1980. J. Virol, (в печати).
И. Карта плазмиды pBR322
Плазмида pBR322 - самая популярная плазмида, широко используемая для
субклонирования фрагментов в клетках Е. co-
li. Она содержит область начала репликации, полученную от плазмиды
ColEl. Поэтому число копий самой этой плазмиды и связанной с ней ДНК
достигает 30 на клетку. Плазмида pBR322 несет также гены, которые
сообщают содержащим ее клеткам устойчивость к высоким концентрациям таких
антибиотиков, как тетрациклин и ампициллин. Ген TetR лежит в области
нуклеотидов 0-1500 на приведенной физической карте, а ген AmpR занимает
область нуклеотидов 3600-4300. Начало репликации локализовано вблизи
нуклеотида 2500.
Для многих рестриктаз в ДНК плазмиды pBR322 имеется лишь по одному сайту-
мишени. Поэтому эти сайты можно использовать для клонирования. К таким
рестриктазам относятся ВатШ, Sail и Hindlll (сайты для которых находятся
в пределах гена TetR), Pvul и Pstl (сайты для которых лежат в пределах
гена Ашрн), и .EcoRI, Aval, Pvull, Clal и Ball (сайты для которых лежат
вне последовательностей, необходимых для устойчивости к лекарственным
препаратам или для репликации).
10. Карта делеций в гистидиновом опероне
163
Приложение 10
Карта делеций в гистидиновом опероне
3050
Приложение И
Шаблоны
I
0,1
"I- 0,2
-I-
0,3
I
0,4
I
0,5
I
0,6
I- 0,7
I
0,8
~I-
0,9
-1
1,0
o, o,
03 03 О, Ш О oo
-3 '-J --J ''I
О row 03 03 03 03 fifo W 03 -*
gtbs; = H x a
2 О
о oooo
Ш Ш ШШ Ш О -* COW U! (Я 03 -*ш -"
О СЛЗ
b-рШНпИ
Размер делеций, kb Деления или замещение Размер замещений, i<b
сэ\
-0,41
Lac5

- ЗлЛзЧ^^
о 3,76 со
О О!
-3,38 ,Ь522 "
J3.
со
03
-7,99
Ь538
-5,93
Ь2
-2,45
i2l
2.01
. -1,08 I i434
I -3,04 , Vnin5,-i
Предыдущая << 1 .. 54 55 56 57 58 59 < 60 > 61 62 .. 63 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed