Генетика бактерий - Девис Р.
Скачать (прямая ссылка):
мМ). Добавьте также либо 6 мл фузаровой кислоты (с концентрацией 2
мг/мл), либо 10 мл хинальдиновой кислоты (с концентрацией 10 мг/мл).
О. Агар для столбиков
На 1 л Питательный бульон (Difco) 8 г
Агар Bacto 6 г
Автоклавируйте (или нагрейте в микроволновой печи),тщательно перемешайте.
Разлейте по флаконам и затем автоклавируйте, чтобы простерилизовать. Не
нужно разливать стерильную среду по стерильным флаконам, не проводя после
этого повторной стерилизации.
П. Среда Я,КМ
Эта среда состоит из бульона для фага Я, 0,01%-ного дрожжевого экстракта
и 0,2%-ного раствора мальтозы. Она
1. Среды, концентрации антибиотиков, добавки
145
часто упоминается в литературе, но обычно ее можно заменить средой TYM.
Р. Бульон TYM
Это бульон LB, содержащий 0,2% мальтозы. Для этого в бульон добавляют
1/100 объема стерильного 20%-ного раствора мальтозы.
С. Среда для разведения фага К
10 мМ трис-НС1 (pH 7,5) и 10 мМ MgS04. Иногда для длительного хранения
препаратов фага К рекомендуется добавить NaCl до 50 мМ и желатину до
0,01%. Это особенно полезно, если фаг был очищен в растворе CsCl.
Т. Забуференный физиологический раствор
0,85% (в/об) NaCl и 0,066 М NaP04 (pH 7,0).
II. Концентрации антибиотиков
Обычно в богатые среды добавляют больше антибиотика, чем в минимальные.
Исключение составляют те чашки, которые используются в опытах по
трансформации. Рекомендуем следующие конечные концентрации: для богатых
сред - тетрациклина 20 мкг/мл, ампициллина 50 мкг/мл; для минимальных
сред и для сред, используемых в опытах по трансформации,- тетрациклина 10
мкг/мл и ампициллина 25 мкг/мл.
III. Пищевые добавки
Ниже приведен список пищевых добавок, которые часто используются при
работе с бактериями. Основные растворы приготавливают так, чтобы нужная
конечная концентрация получалась при добавлении 5 мл основного раствора к
1 л среды. Лимитирующей является такая концентрация добавки, при которой
нуждающийся в ней ауксотроф будет образовывать крошечные колонии, легко
отличимые от колоний клеток дикого типа. Добавление 5 мл основного
раствора на 1 л среды обеспечивает нормальный рост ауксотрофа.
6-301
146
Раздел III. Приложения
Пищевая добавка
gs
о. .
f- (U * " яЭ
§3
" о
В W * И
" ?
ш 2 я & " с
ч=
г
* Z ко"
5* §
18 я
ЧЙ&
4> К
н в О В-
Аденин 5,0 0,001 1,35 Ф
Аденозин 5,0 0,001 2,67 А
Аланин 0,47 0,84 А
Аргииин 0,6 0,01 2,53 0,86 А
Аспарагин 0,32 0,84 Ф
Аспартат калия 0,3 1.0 Ф
Биотии 0,1 0,49 А
Валин 0,3 0,7 А
Гистидин 0,1 0,005 0,31 0,25 А
Гистидинол 1,0 4,28 А
Г лицин 0,13 0,2 А
Глутамат натрия 5,0 Ф
Глутамин 5,0 14,6 А
Гуанин 0,3 0,91 А
Гуанозин 0,3 1,7 А
Диаминопимелиновая кислота 0,1 0,38 А
Изолейцин 0,3 0,79 А
Лейцин 0,3 0,005 0,79 0,086 А
Лизии 0,3 0,005 1,1 0,086 А
Метионин 0,3 0,9 0,086 А
Никотиновая кислота 0,1 0,25 А
Пантотенат кальция 0,1 0,48 А
Пиридоксин • НС1 0,1 0,41 А
Пролин 2,0 0,002 4,6 0,005 А
Серии 4,0 0,01 8,4 0,0125 А
Тиамин 0,05 0,337 А
Тимин 0,32 0,81 А
Тирозин 0,1 0,36 Ф
Треонин 0,3 0,71 А
Триптофан 0,1 0,41 Ф
Урацил 0,1 0,003 0,224 0,15 А
Уридин 0,1 0,003 0,488 А
Фенилаланин 0,3 0,99 А
Цистеин 0,3 0,73 Ф
ЭГТА 10,0 2 М А
0,1 нНС1
в 1 нНС1
0,01
нНС1
Нейтра-
лизовать
*А- автоклавирование, Ф- фильтрование.
Приложение 2
Диагностика ауксотрофов (ауксанография)
Состав этих чашек показан в таблице, которая приводится ниже. Все пищевые
добавки используются в тех конечных кон-
2. Диагностика ауксотрофов (ауксанография)
147
центрациях, которые указаны в приложении 1. Состав сред 1-5 приводится в
таблице по вертикали, а сред 6-10 - по горизонтали. Среда 11 содержит
соединения, отсутствующие в других средах. Ее состав приведен внизу
таблицы. В обсуждении приводятся некоторые замечания относительно
использования этих сред.
1 2 3 4 5
6 Аденозин Гуанозин Цистеин Метионин Тиамин
7 Гистидин Лейцин Изолейцин Лизин Валин
8* Фенилала- нин Тирозин Триптофан Треонин Пролин
9 Глутамии Аспарагин Урацил Аспарагиновая кислота Аргинин
10 Тимин Серии Глутамино- Диаминопи-вая кислота мелииовая кислота
Глицин
11 Пиридоксии Никотиновая кислота, биотии, пантотенат, Аланин
* См. примечание 5 в обсуждении.
Обсуждение
1. Некоторые мутанты, нуждающиеся в пуринах, растут на аде-нозине или
гуанозине; такие мутанты будут расти на смесях 1, 2 и 6.
2. Некоторым мутантам, нуждающимся в пуринах, необходимы аденозин +
тиамин. Такие мутанты будут расти только на смеси 6.
3. Мутанты руг А нуждаются в у р ациле и аргинине. Они растут только на
смеси 9.
4. Мутанты, которым необходимы изолейцин + валин, будут расти только на
смеси 7. При работе с Е. coli К.12 в смесь 5 необходимо добавить
изолейцин, так как в отсутствие изолейцина все штаммы К.12 чувствительны
к валину.
5. Те мутанты, у которых блокирована ранняя стадия пути биосинтеза
ароматических аминокислот, будут расти только на смеси 8. Кроме веществ,
перечисленных в списке, среда 8 содержит также парааминобензойную кислоту
