Генетика бактерий - Девис Р.
Скачать (прямая ссылка):
На 1 л Триптон Bacto 10 г
Дрожжевой экстракт Bacto 5 г
NaCl 5 г
Для чашек Агар Bacto 15 г
Для верхнего 7 г
агара
Б. Среда для фага X
На 1 л Триптон Bacto 10 г
NaCl 5 г
Для чашек Агар Bacto 12 г
Для верхнего 7 г
агара
В. Среды с агарозой (для использования при выделении ДНК быстрым
методом)
Вместо агара Bacto в обычной прописи используйте 10 г агарозы на 1 л для
нижнего слоя агарозы и 6 г агарозы на 1 л для верхнего слоя агарозы.
Г. Индикаторные чашки Green
На 1 л Триптон Bacto 8 г
Дрожжевой экстракт Bacto 1 г
NaCl 15 г
Агар Bacto 15 г
Автоклавируйте и затем добавьте стерильные растворы:
40 %-ная глюкоза 34 мл
2,5 %-ный ализариновый жел- 25 мл
тый
2 %-ный анилиновый голубой 6,6 мл
Ализариновый желтый G и GG производятся фирмой МСВ, а анилиновый голубой
- фирмой Fisher. Непосредственно перед использованием раствор
ализаринового желтого следует прогреть, так как при комнатной температуре
этот краситель нерастворим.
142
Раздел III. Приложения
Д. Чашки Red (для выявления образования |3-лактамазы) На I л
Триптиказа (BBL) NaCl
Агар Bacto
10 г 5 г 10 г
Автоклавируйте, а затем добавьте:
1-5 мг ампициллина в зависимости от партии. Ампициллина должно быть
добавлено столько, чтобы только-только подавить чувствительные клетки,
25 мг хлористого 2,3,5-трифенилтетразолия,
33 мл стерильного 30%-ного раствора глюкозы.
Е. Супербульон На 1 л
Ж. Среда с трипти-казой и ЭДТА На 1 л
Для чашек Для верхнего агара
Триптон Bacto 33 г
Дрожжевой экстракт Bacto 20 г NaCl 7,5 г
10 М NaOH 3,5 мл
Триптиказа (BBL) 10 г
NaCl 5 г
Агар Bacto 10 г
6,5 г
3. Среда Е (минимальная среда Фогеля - Боннера)
Для приготовления 1 л среды Е 50X растворяйте в воде при температуре не
ниже 45°С указанные ниже соли (в том порядке, в котором они приведены).
Храните с хлороформом и стерилизуйте после того, как разведете.
На 1 л среды Е 50 х : Дистиллированная вода 670 мл
MgS04 • 7Н02 10 г
Лимонная кислота • 1 Н20 100 г
К2НР04 безводный 500 г
NaHNH4P04 • 4Н20 175 г
Жидкая среда. Разведите в 50 раз, простерилизуйте и добавьте необходимые
сахара и пищевые добавки.
Для чашек. Приготовьте равные объемы среды Е 2х и 3%-ного агара Bacto,
автоклавируйте их по отдельности и добавьте необходимые сахара и пищевые
добавки.
И. Среда NCE (среда Е без углерода или без цитрата)
Этой средой пользуются в тех случаях, когда в селективной среде должен
использоваться какой-нибудь источник углерода, отличный от глюкозы или
цитрата. Клетки Salmonel-
1. Среды, концентрации антибиотиков, добавки
143
1а могут использовать цитрат, добавленный в среду Е в качестве
хелатирующего соединения. Поэтому для Salmonella нужно применять
минимальную среду без цитрата. Если исключить из концентрата среды NCE
MgS04 и добавлять его в среду уже после ее разведения, то можно
приготовить среду NCE, концентрированную в 50 раз.
NCE 50х(1 л)
кн2ро4 197 г
к2нро4-н2о 325,1 г
Na (NH4)HP04-H20 175 г
н2о 925 мл
MgS04 265,5 г
н2о 1000 мл
Раствор MgSOJOOOX (1 М MgS04 для среды NCE)
Чтобы приготовить среду NCE 2х, смешайте
1 л Н20,
40 мл концентрированной среды NCE50X,
2 мл раствора MgS041000x.
Автоклавируйте эту смесь, добавьте равный объем расплавленного агара 2Х
(3%-ного), добавьте источник углерода (обычно до конечной концентрации
1%) и разливайте чашки.
К. Среда М9
На 1 л Na2HP04-H20
КН2Р04 NaCl NH4C1
Автоклавируйте, затем добавьте стерильные растворы:
1 М MgS04 0,01 М СаС12
(Если используете обычный неочищенный агар, то СаС12 можно не добавлять.)
Для чашек. Приготовьте равные объемы среды М9 2.Х и 3%-ного агара Bacto.
Автоклавируйте по отдельности, смешайте и добавьте сахар (например, 0,2%-
ный раствор глюкозы или мальтозы) и необходимые пищевые добавки. Для
приготовления верхнего агара М9 смешайте равные объемы автоклавированных
по отдельности среды М9 2Х и 1,3%-но-го агара Bacto. Иногда при
длительном хранении верхнего агара М9 (или при повторном его плавлении)
образуется тонкий преципитат. Такой преципитат безвреден.
Л. Чашки Мак-Конки
На 1 л Основной агар Мак-Конки (Difco) 40 г
Автоклавируйте, затем добавьте сахар до 1%. Фирма Difco производит также
среду, уже содержащую лактозу.
6 г
3 г
0,5 г
1 г
1 мл
10 мл
144
Раздел III. Приложения
М. Чашки ЭМС
На 1л Основной агар EMB (Difco) 27,5 г
или
Триптон Bacto 10 г
Дрожжевой экстракт Bacto 1 г
NaCl 5 г
KH2P04 2 г
Агар Bacto 15 г
Автоклавируйте, затем добавьте стерильные растворы: 10 ш
4 % -ный раствор эозинового жел-
того
0,65 % -ный раствор метиленово 10 mj
го синего, сахар до 1%
Н. Селективные чашки Бохнера (для отбора мутантов Tets)
Раствор А Триптон Bacto 10 г
Дрожжевой экстракт Bacto 5 г
Хлортетрациклин • НС1 50 мг
Агар 15 г
н2о 500 мл
Раствор Б NaCl 10 г
NaH2P04-H20 10 г
Г люкоза 2 г
н2о 500 мл
Растворы А и Б автоклавируйте по отдельности при давлении 1,05 атм в
течение 20 мин (важно выдержать время). Смешайте и охладите до такой
температуры, при которой можно разливать чашки. Добавьте 5 мд ZnCl2 (20
