Генетика бактерий - Девис Р.
Скачать (прямая ссылка):
/шП504) hisT 1504)
TR5601 his09675 (hisG 1102, TR5991 his-2321
hisT 1504) TR5558 his-9616 (his G1102,
TR5589 ftts09663 (hisG1102, hisT 1504)
hisT 1504) TR5561 /its-9619 (hisG1102,
TR5611 his09685 (hisGl 102, hisT 1504)
hisT 1504) TR5992 his-203
TR2895 his G6570 (hisO 1242) TR5993 /its-1380
TR2765 hisG6434 (hisO 1242) TR3067 his-8443
TR5063 hisG8642 TR3321 his-8475
TR6004 hisG7Q8 TR3456 his-8495
TR5105 hisG8663 (hisO 1242) TR3335 his-8473 (dhuA 1)
TR6005 hisG575 TR3325 his-8477
TR6006 hisG3037 TR3320 his-8479 (edd)
TR6007 hisG572 TR5994 his-4902
TR6008 hisG460 TR6003 his-2236 (hisO 1242)
TR6009 hisG2779 TR5995 his-646
TR6010 hisD497 TR5996 his-2228
TR6088 hisD2578 TR2880 ftts-6555
TR6012 hisD3018 TR5999 his-712
TR6013 hisD3794 TR6000 his-152
TR6014 hisD3009 (ara-9) TR6001 ftts-2630
TR1626 hisD3052 (uyrB) TR6002 his-129
TR6015 hisD492 TR2864 his-6539 (hisO 1242)
TR6016 hisD 113 TR5997 his-2225
TR6017 hisD 10 TR5998 his-3050
TR6089 hisD476
LT2 дикий тип
P22 (HT, int~)
Все приведенные выше /гг^-мутанты для роста на минимальной среде
нуждаются лишь в гистидине. В скобках указаны дополнительные мутации (ни
одна из них не приводит к ауксо-трофности). Перед использованием каждый
штамм нужно рассеять до отдельных колоний и проверить на потребность в
гистидине. В качестве контролей используется донорный фаг, выращенный на
LT2 (his+, дикий тип) и TR5998 (his-ЗОЬО, деления всего оперона his). В
качестве контрольного реципиента используйте также TR5998. В качестве
дополнительного контрольного реципиента можно использовать какой-нибудь
неродственный ауксотроф (например, ригВЫ или purF 145 из эксперимента
13); лизаты фагов, выращенных на всех донорных штаммах, должны
образовывать рекомбинанты с этими ауксо-трофами.
Эксперимент 8 7gt7-ara6
Пул гибридов A,gt7c BcoRl-фрагментами ДНК 5. typhimurium
A,gt4-/ac5
RD100 (Е. coli) hisB463
Список штаммов
17
BNN45 (Е. coli) hsdR- hsdM+ supE44 (su2+) supF (su3+) Bl~ met~
Эксперимент 9 A,gt5-/ac5, pBR322 BNN45 (см. эксперимент 8)
Эксперимент 10 См. эксперимент 7
RD101 =?'. coli HB101 (pBR322-fttsOGD)
Эксперимент 11 DB5681 (E. coli) thi-l (Bl_) lop-8 (суперпродуцент лигазы)
(Ximtn434 cl-ts 5am7)
Эксперимент 12 HB101 (E. coli) hsdR- hsdM~ recA13 supE44 (su2+) lacZ4
leuBQ proA2 thi-l (Bl~) SmR RD102 = HB101/X (устойчив к адсорбции фага X)
RD103 = HB101 (pBR322)
Эксперимент 13
Штамм Положение на карте, мин
TR5654 strA 1 thrA9 0
TR5655 strA 1 leu-485 3
TR5656 strA 1 ргоАЗб 7
TR5657 strAl purE8 12
TR5658 strA 1 pyrCT 22
TR5659 strAl pur В13 25
TR5660 strA 1 pyrF\46 33
TR5662 strA 1 his-2236 44
TR5663 strA 1 purF\45 49
TR5661 strAl агоСЬ 49,5
TR5664 slrAl cysA533 52
TR5665 strA 1 cysC5l9 60
TR5666 strAl serAl3 63
TR5667 strAl s//sG439 72
TR5668 strAl cysE396 79
TR5669 strA 1 (7У-508 83
TR5670 strAl metA53 90
TR5688 strAl ригАХЬЬ 93
TR5671 strAl pyrB64 98
TT62I7 pyrCl strAljFF 114 lac+ zzf-20 : : TnlO (ориентация A)
TT628 pyrCl strAlIF'ts 114 lac+ zzf-21 : : TnlO (ориентация В)
TT629 pyrCl sirAljF'u 114 lac+ zzf-22 : : TnlO (ориентация А)
Методика 3 Р22 (НТ, int~)
18
Список штаммов
Методика
Методика
Методика
Методика
Методика
Методика
Методика
Методика
Методика
Методика
Методика
5 NK337 (см. эксперимент 1)
TR4368 his-Ш (Р22 sieATl)
Р22-503 {cl-7 72amN 114 /ЗатН101)
TR248 cysA\349&m /iisC527am
TR251 q/sA1349am /u'sC527am supD (sul+)
7 См. эксперименты 5 и 6 9 Xc 1857 6515 6519 пш5 intmi29
Xamp = Xcl857 6515 6519 mtam29 Tn2 11 DB5681 (см. эксперимент 11)
DB5683 (E. coli) thi-l (Bl~) (Acl857 Sam7)
14 Подробное описание структур см. в приложении 92 A.gt 1 -Л.В
A,gt4-0 Xgt5-lac5 A,gt7-ara6 Xgt7-lacb X607
XsepQ-lacb, lacb Харон 4 A.590 A.760
A,gt30-Ec6
A,?t40-?,B
15 RD104 =-•?¦. coli C600 hsdR- hsdM~
A: E. coli N205 recA~ (Ximm434 cl-ts 62 red3 ?'am4Sam7)
В: E. coli N205 recA~ (Ximm434 cl-ts 62 red3 Z)aml5Sam7)
16 SF8 (E. coli) hsdR- hsdM- recB recC lop-11 (суперпродуцент лигазы)
supEAA (sw2+) gal-96 SmR leuB6 thi-l (Bl_) thr~
HB101 (см. эксперимент 12)
BNN45 (см. эксперимент 8)
17 RD102 = HB101A (см. эксперимент 12)
18 HB101 (см. эксперимент 12)
RD102 = HB101/?v (см. эксперимент 12)
BNN45 (см. эксперимент 8)
SF8 (см. методику 16)
19 BNN45 (см. эксперимент 8)
RD105 (E. coli) trpC9830
29 E. coli 594' (XpolA cI857 шя5 Qam73 Sam7)
E. coli El 150 (XWam Earn T4/igcl857ninb SamlOO)
Раздел I
ЭКСПЕРИМЕНТЫ
Эксперимент 1
Выделение вставок Тп 10, приводящих к ауксотрофности
Введение
Транспонируемые элементы могут встраиваться во многие точки бактериальной
хромосомы. Если сайт включения оказывается в пределах какого-либо гена
бактерии, то линейная непрерывность этого гена нарушается и он
инактивируется. При встраивании элемента лекарственной устойчивости в
ген, кодирующий какой-нибудь фермент биосинтеза, получается мутант с
двойственным фенотипом. Потеря способности к биосинтезу того или иного
соединения приводит к потребности в соответствующем питательном веществе
