Генетика бактерий - Девис Р.
Скачать (прямая ссылка):
но они представляют определенную ценность и сами по себе. Отдельные
методики можно использовать при решении разнообразных задач, при этом они
описаны таким образом, чтобы быть по возможности независимыми друг от
друга. Книга построена так, чтобы легче было пользоваться ею в
лаборатории: поэтапное описание операций приводится отдельно от
обсуждения таких вопросов, как обоснование и план эксперимента. Мы
надеемся, что методики окажутся полезными в исследовательских
лабораториях и сами по себе.
В руководстве приведен также список штаммов, необходимых для предлагаемых
экспериментов и методик. В некоторых случаях (например, при клонировании
в векторах 1) указано несколько приемлемых штаммов, из которых нужно
использовать, естественно, лишь один. Полный набор штаммов фагов и
бактерий можно приобрести в лаборатории Коулд-Спринг-Харбор.
Правила работы и безопасность
В большинстве экспериментов, излагаемых в этом руководстве, используется
Salmonella typhimurium. После многих лет культивирования в лабораторных
условиях штамм LT2 S. typhimurium (из которого получены все используемые
здесь штаммы), по-видимому, уже более не патогенен для человека, хотя и
происходит от штаммов, которые несомненно были способны вызывать диаррею.
За много лет использования в лабораториях S. typhimurium LT2 ни разу не
сообщалось о случаях инфекции, хотя известно о нескольких случаях
заражения людей сходными штаммами (например, LT7 или 1559). Штамм LT2
оказывается ослабленным также и для мышей, хотя в высоких дозах может еще
их убивать.
Поэтому все эксперименты следует проводить, пользуясь обычными
благоразумными приемами работы с бактериями. Стеклянную посуду,
находивщуюся в контакте с культурами, прежде чем мыть, необходимо
стерилизовать. Стерилизовать нужно и сами культуры. Отходы (чашки Петри)
нужно перед их удалением стерилизовать или сжигать дотла. Следует запре-
11
тить засасывать материал в пипетки ртом, хотя мы спокойно относимся к
пипетированию разведенных суспензий бактерий (и фагов) ртом.
Некоторые эксперименты, приведенные в данном руководстве, включают опыты
с рекомбинантными ДНК. Такие опыты, однако, не подпадают под действие
Правил по работе с рекомбинантными ДНК Национальных институтов
здравоохранения (НИЗ), так как известно, что и в обычных условиях могут
образоваться рекомбинанты между 5. typhimurium и Е. coli за счет
рекомбинации между их хромосомами. Тем не менее при работе с
рекомбинантами "мы принимаем те же меры предосторожности, что и при
работе с самой Salmonella.
При использовании ДНК, выделенной из организмов, отличных от Salmonella,
описанные здесь эксперименты могут подпадать под правила НИЗ, и перед
тем, как их проводить, нужно познакомиться с этими правилами. Все штаммы,
используемые нами в качестве клеток-хозяев для рекомбинантных ДНК,
являются производными Е. coli К12. Поэтому фактически все неза-прещенные
эксперименты требуют самое большее Р1-уровня физической защиты.
Номенклатура штаммов и мутаций
Как для Е. coli, так и для Salmonella используется одна и та же
унифицированная система обозначений. Система эта была впервые предложена
Демерецем и др. (Demerec et al., 1966). Чтобы приспособить ее и к IS-
элементам (инсерционным элементам), были добавлены новые правила. Эти
изменения описали Кэмпбелл и др. (Campbell et al., 1977) и Чамли и др.
(Chumley et al., 1979). Сводные данные о типах мутаций, а также их
обозначения и положения на карте в случае Е. coli__ можно найти в обзоре
Бахман и Лоу (Bachman, Low, 1980), а в случае 5. typhimurium - в работе
Сандерсона и Хартмана (Sanderson, Hartman, 1978).
Основная система. Каждому бактериальному штамму независимо от количества
имеющихся у него мутаций приписывается определенный номер. Номер этот
относится к определенному изоляту. На практике обозначение штамма состоит
из двух заглавных букв (обозначающих соответствующую лабораторию)' и
номера, который является номером штамма в коллекции этой лаборатории.
Например, штамм TR248 несет мутации hisC527 и cysAl349 и относится к
коллекции Джона Рота. Для новых коллекций штаммов следует использовать
такие сочетания двух букв, которые до этого не применялись.
Каждый мутантный локус обозначается символом, образованным тремя буквами
(строчными, набранными курсивом). Обычно Их выбирают, исходя из явного
фенотипа мутанта или
- тгябппатории КолД-Спринг
В 1980 г. начал"" работа "^ДртиГхарпеР" "JS."(tm)'"P",ST
П"ТР
пиЯЮщие на биосинтез
метода отбоЕа> ДчаХГ&^Для °^озН^^Щего нТэ^от прогистидина, об03^ в ЭТ0М
локусе или вли ят заглавную
цесГсцНпоСле°^нхбуквенното^сим^^^^октрансаминазу) которая
участвуе^вПби^смтез^гистидина.)^^^^^аютс gp^eft
Индивидуальны^ мут0г0 ^ ^ локуса^ ^ ^
25.1SS нГГло ода;.** T"jSz"
S" никакая ДРУ(tm)" "SaSIeT, не может носить номер какой ген н этом локусе
<шва, при-
527.) "^обходимо обозначит Ф (Ьенотипа можно
чемЧсадТе0лнть^о надо та,
сДрописн^ буквы. Например.
Введение
13
