Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Девис Р. -> "Генетика бактерий " -> 11

Генетика бактерий - Девис Р.

Девис Р., Ботстайн Д., Рот Дж. Генетика бактерий — М.: Мир, 1984. — 176 c.
Скачать (прямая ссылка): genetikabakteriy1984.djv
Предыдущая << 1 .. 5 6 7 8 9 10 < 11 > 12 13 14 15 16 17 .. 63 >> Следующая

рассейте их для получения отдельных колоний на чашках с питательной
средой (без тетрациклина). В случае штамма ТТ513 сохраните также такие
колонии, которые растут на среде Е + гистидинол, но не растут на
минимальной среде
Характеристика новых мутантов hisD
7. Посейте жидкие культуры из отдельных колоний новых мутантов his.
8. Разотрите по 0,1 мл культур мутантов на чашках Е +низкая концентрация
гистидина. После того как жидкость впитается, нанесите капли лизатов
картирующих фагов, выращенных на серии точковых /us-мутантов (см.
эксперимент 7). Чашки не переворачивайте. Инкубируйте при 37°С.
9. Просмотрите результаты картирующих скрещиваний.
10. Сохраните все охарактеризованные делеционные или инверсионные
мутанты, заложив их в столбики. Занесите их в журнал.
Обсуждение
1. В штамме ТТ513 вставка Тп 10 находится вне оперона со стороны его
промотора. Штаммы ТТ1151 и ТТ1127 содержат вставки Тп 10 внутри гена MsC,
который находится непосредственно рядом с геном hisD ближе к промотору.
2. Отбор будет происходить лишь в том случае, если на чашку высевать
небольшое количество клеток (106 или менее). Отбор не будет происходить в
присутствии избытка ионов железа или марганца. Поэтому следует обратить
особое внимание на приготовление среды.
3. Выделение отдельных колоний проводят для того, чтобы освободиться от
фона родительских клеток. Такие родитель-
3. Делеции, вызванные элементом Тп 10
31
ские клетки способны расти на тех средах, которые будут использованы при
проверке на ауксотрофность.
4. (Этап 5); содержащие искомые перестройки штаммы будут расти на среде Е
+ гистидин, но не на среде Е + гистидин + те-традиклин или на среде Е 4-
гистидинол. Большинство таких перестроек будет делециями, но некоторые
могут оказаться и инверсиями. В штамме ТТ513 инверсия с точкой разрыва
внутри оперона, но дистальнее гена hisD должна привести к ауксотрофности
по гистидину, но при этом должна сохраниться способность использовать
гистидинол в качестве источника гистидина (hisD+).
5. (Этапы 7 и 8); эти скрещивания по картированию делеций следует
проводить так, как описано в эксперименте 7.
6. (Этапы 6 и 9); интерпретация результатов. В случае штамма ТТ513 (ТпУО
вне промотора и оперона) любая делеция, повреждающая промотор /u's-
оперона, приведет к фенотипу His- и к неспособности использовать
гистидинол, даже если ген hisD и остается интактным. Полученные из клеток
ТТ513 штаммы с инверсиями будут /z/s-ауксотрофами, если точки разрыва
попадают внутрь этого оперона. Если точка разрыва находится между
промотором /z/s-оперона и дистальным концом гена hisD, то они будут
неспособны использовать гистидинол. Они могут использовать гистидинол
лишь в том случае, если точка разрыва при образовании инверсии находится
от промотора дистальнее гена hisD.
Если исходить из штамма со вставкой в гене his С, то мутанты с делециями,
распространяющимися на промотор (или удаляющими его), будут неспособны
использовать гистидинол. Мутанты же с инверсиями, точки разрыва которых
находятся между промотором /u's-оперона и дистальным в отношении
промотора концом гена hisD, также будут неспособны использовать
гистидинол,
При картирующих скрещиваниях делеции не могут давать рекомбинантов с
целым рядом последовательно расположенных точковых мутаций. Инверсии
могут рекомбинировать со всеми точковыми мутациями, за исключением тех,
которые расположены непосредственно рядом с точкой разрыва. Инверсии
неспособны давать рекомбинантов His+ при скрещивании с делециями,
удаляющими хотя бы одну из точек разрыва. Можете сами проверить эти
утверждения, нарисовав соответствующие схемы.
Литература
Bochner В., Huang Н.-С., Schieven G., Ames В. N., 1980. Positive
selections for loss of tetracycline resistance, J. Bacteriol., 143, 926.
32
Раздел I. Эксперименты
Kleckner N" Reichart К., Botstein D., 1979. Inversions and deletions of
the Salmonella chromosome generated by the trans'Iocatable tetracycline-
resistance element, J. Mol. Biol., 127, 89.
Ross D" Swan J., Kleckner N., 1979. Physical structures of Tn/0-promoted
deletions and inversions, Role of 1400 bp inverted repetitions, Cell, 16,
721.
Эксперимент 4
Локализованный мутагенез
Введение
Когда известно положение изучаемого гена в хромосоме, часто бывает
полезно уметь получать вблизи этого гена новые мутации. Как это сделать,
предложили Хонг и Эймс (Hong, Ames, 1971). Они мутагенизировали суспензию
фага Р22, который осуществлял общую трансдукцию, и такой суспензией
проводили трансдукцию, отбирая при этом те клетки, в которых ген донора
встроился вблизи исследуемой области. Каждый встроившийся фрагмент
хромосомы донора включает также и соседний сильно мутагенизированный
сегмент хромосомы. Поэтому вероятность приобретения трансдуктантами
мутаций в генах, тесно сцепленных с селектируемым маркером, оказывается
высокой. Поскольку мутагеном обрабатывался лишь незначительный участок
хромосомы в частице фага, то вероятность множественных мутаций
Предыдущая << 1 .. 5 6 7 8 9 10 < 11 > 12 13 14 15 16 17 .. 63 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed