Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
В общем, эксперименты, выполненные Цинкернагелем и Догерти [15], свидетельствуют о том, что у мышей FX(A X Q) могут быть получены четыре различные субпопуляции цитотоксических Т-лимфоцитов, специфичных к одному и тому же вирусу (У): одна, распознающая У и Ка, вторая — V и Кч, третья — У и Da и четвертая — V и D4. Эти наблюдения наилучшим образом согласуются с гипотезой существования на Т-лимфоцитах распознающей структуры, специфичной к собственным молекулам МНС и характеризующейся клональным распределением. Иными словами, каждая из молекул МНС распознается уникальным рецептором.
15.2.5. Выявление независимых популяций Т-лимфоцитов гибридов Ft, специфичных к одному антигену в ассоциации с молекулами МНС класса II родительских линий
15.2.5.1. Пролиферирующие Т-лимфоциты
В 1976 г. представления о субпопуляциях клеток Fx были распространены и на Т-лимфоциты, рестриктированные по /-области. Наиболее полное иссле дование пролиферирующих Т-лимфоцитов с использованием положительно) и отрицательной селекции для выявления двух субпопуляций осуществил! Пол и др. [16]. Гибриды морских свинок Fx(2 х 13) иммунизировали овальбу мином (ОА) в полном адъюванте Фрейнда, выделяли Т-лимфоциты перитонеального эксудата и стимулировали их in vitro нагруженными ОА макрофагами линии 2 или линии 13. Спустя неделю, клетки собирали, отмывали и вновь стимулировали нагруженными ОА макрофагами родительских линий. Еще через 4 дня определяли включение 3Н-тимидина для количественной оценки индуцированного антигеном пролиферативного ответа. Как видно из табл. 15.9, неселектированные Т-лимфоциты перитонеального эксудата гибрида Fx хорошо отвечают на нагруженные ОА макрофаги как линии 2, так и линии 13. Однако, если в первичной культуре лимфоциты стимулируют ОА на макрофагах линии 2, рестимуляция нагруженными ОА макрофагами линии 2 вызывает выраженный ответ, а стимуляция нагруженными ОА макрофагами линии 13 не дает значимого ответа. Стимуляция при первом культивировании О А на макрофагах линии 13, наоборот, вызывает сильный ответ на нагруженные ОА макрофаги линии 13 и значительно более слабый — на нагруженные ОА макрофаги ли-
Таблица 15.9. Положительная селекция Т-лимфоцитов гибридов нагруженными антигеном макрофагами родительских линий (по [16])
МФ, использо Пролиферация, имп./мин (х 10-3)
Т клетки Fi 1) Ненагруженные Нагруженные ОА
антигеном
Неселектированные 2 2,5 44.5
13 3.9 52,3
Селектированные на ОА-на гру 2 0,8 85,3
женных МФ линии 2 13 1,0 1.8
Селектированные на ОА-нагру- 2 0,9 23,4
женных МФ линии 13 13 2,7 83,3
1) Т-лимфоциты получали фракционированием на колонках с синтетической ватой клеток перитонеального эксудата Fi (2x13) морских свинок, иммунизированных овальбу-мином (ОА) в полном адъюванте Фрейнда. Способность к ответу некоторых клеток определяли непосредственно (неселектированные), тогда как другие в течение недели до рестимуляции культивировали с нагруженными ОА макрофагами (МФ) линии 2 или 13.
нии 2. Эти данные указывают на возможность избирательного обогащения субпопуляции Т-клеток, специфичной к антигену в ассоциации с макрофагами одной из родительских линий.
В опытах по отрицательной селекции Т-лимфоциты гибридов Fx также стимулировали нагруженными ОА макрофагами линии 2 или 13, но на этот раз через 2 дня в культуры добавляли 2-бромдезоксиуридин (БУдР). Клетки инкубировали еще в течение 24 ч, чтобы этот аналог тимидина включился в ДНК отвечающих клеток. Затем культуры выдерживали на свету, что приводило к активации БУдР, перекрестной сшивке ДНК, подавлению репликации и гибели клеток. Выжившие клетки отмывали от БУдР и повторно культивировали с нагруженными антигеном макрофагами каждой из родительских линий. После дополнительного культивирования в течение четырех дней ответ определяли
Таблица 15.10. Отрицательная селекция Т-лимфоцитов гибридов Fx, нагруженными антигеном макрофагами родительских линий х)
(по [16])
ОА-нагруженные Антиген Пролиферация во вторичной культу-
МФ в первичной ре на МФ, им п./мин (XIО-3)
культуре Линия 2 Линия 13
Линия 2 Нет 1,0 4,9
ОА 1,9 25,4
PPD 86,8 55,9
Линия 13 Нет 26,8 2.4
ОА 102,7 4,5
PPD 95,3 67,7
1) Т-лимфоциты морских свинок Fi(2xl3), иммунизированных ОА и PPD, культивировали в течение 2 дней с нагруженными ОА макрофагами (МФ) линии 2 или 13, после чего добавляли бромдезоксиуридин. После дополнительного культивирования в течение 24 ч. клетки 90 мин. выдерживали на свету, отмывали и повторно культивировали с макрофагами Fj линий 2 или 13, нагруженными ОА, PPD или ненагруженными (вторичная культура). Включение зн-тимидина определяли через 3 дня (имп./мин). Курсивом выделено включение при специфической отрицательной селекции.
