Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Дэвид Г. -> "Иммунология. Том 2" -> 73

Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.

Дэвид Г., Томас Дж. Иммунология. Том 2 — М.: Мир, 1987. — 456 c.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка): immunologiyat21988.djvu
Предыдущая << 1 .. 67 68 69 70 71 72 < 73 > 74 75 76 77 78 79 .. 283 >> Следующая

В последнее время для окончательного подтверждения роли молекул класса I как рестриктирующих элементов используются молекулярно-биологические методы клонирования и трансфекции генов. Так, например, инфицированные вирусом везикулярного стоматита (ВВС) L-клетки мышей (Н-2к), в которые был трансфецирован геномный клон, содержащий ген H-2Ld, служили мишенями для BBC-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов мышей двух различных линий с гаплотипом Н-21. Этот цитотоксический эффект специфически подавляется моноклональными антителами против молекул H-2Ld, но не моноклональными антителами против молекул H-2Dd. Т-лимфоциты не лизировали ложно трансформированные клетки, которые не экспрессируют продукт гена H-2Ld. Этими экспериментами Форман и др. [14] продемонстрировали отчетливо, что для осуществления литической функции цитотоксических Т-лимфоцито! на клетках-мишенях должен быть экспрессирован продукт именно гена H-2L1 в дополнение к антигенам вируса везикулярного стоматита.
Эксперименты с использованием мутантов и переносом генов показали, что молекулы класса I являются рестриктирующими элементами, распознаваемыми цитотоксическими Т-лимфоцитами. Учитывая это, можно теперь вер нуться к экспериментам по положительной селекции клеток F1? описаннш в табл. 15.6, и убедиться, что результаты этих опытов нельзя объяснить аллель ным исключением структур клеточных взаимодействий. Это связано с тем, что такими структурами клеток-мишеней являются молекулы МНС класса I, аллельные варианты которых кодоминантно экспрессированы на отвечанще!
популяции Т-лимфоцитов гибридов Fx. Следовательно, наиболее вероятная интерпретация этих результатов заключается в существовании в популяции отвечающих клеток Fx двух независимых субпопуляций цитотоксических Т-лимфоцитов, каждая из которых специфична к вирусу в ассоциации с молекулами МНС одного из родителей.
15.2.4. Исследования торможения холодными мишенями
В дополнение к экспериментам по положительной селекции Цинкернагель и Догерти [15] выявили независимые популяции Т-лимфоцитов у гибридов Fx в опытах по конкурентному торможению холодными мишенями (методические подробности см. в гл. 25). При этом клетки-мишени, не меченные 51Сг, в избытке добавляются в ходе определения цитотоксического действия. Они конкурируют с меченными 51Сг мишенями за связывание со специфическими Т-лимфоцитами.
Рис. 15.2. Конкурентное торможение выхода 61Сг из инфицированных вирусом JIXM, меченных L-929 (А) и Р-815 (Б) мишеней в ответ на 7-дневные иммунные цитотоксические Т-клетки мышей Fi (СВА/Н X X BALB/c) (Н-2к х Н-2й) разными дозами немеченых (холодных) инфицированных вирусом JIXM опухолевых клеток Р-815 (Н-2а) (темные кружки) или L-929 (Н-2*) (светлые кружки).
Светлым квадратом показан уровень лизиса опухолевых клеток в отсутствие холодных мишеней, темным квадратом — уровень спонтанного выхода 51Сг в отсутствие цитотоксических Т-клеток [15].
too
80 * 60
51 Сг-мишени ЬШ(н-7к) 51 Гг-мишени Я-815(/t-rf
40
20
J___I__L
_L
/»-815
JL
I
0 13 9
Холодные мишени/"Cr- мишени
0 13 9
Холодные мише-mf'Cr- мишени
Поскольку такое торможение имеет прямое отношение к специфичности популяции Т-лимфоцитов, оно позволяет различать смешанные популяции Т-клеток с разной специфичностью. Пример использования этого подхода при анализе субпопуляций клеток Fi представлен на рис. 15.2. Цитотоксическую активность клеток селезенки мышей F^CBA/H X BALB/c)(H-2ft х H-2d), инфицированных вирусом JIXM, определяли на меченных 51Сг, инфицированных вирусом опухолевых клетках-мишенях каждой из родительских линий. Лизис клеток-мишеней опухоли L-929 (Н-2h) ингибировали инфицированные вирусом немеченые клетки L-929, тогда как инфицированные вирусом немеченые опухолевые клетки P-8i5(H-2d) не вызывали заметного торможения. Это означает, что Т-лимфоциты, цитотоксичные по отношению к вирусу Л ХМ в ассоциации с молекулами H-2ft, не распознают (и не связываются) мишени, несущие вирус JIXM и молекулы H-2d. При определении цитотоксичности той же самой популяции иммунных клеток Fx на меченных 51Сг, инфицированных вирусом ЛХМ мишенях Р-815, наоборот, только инфицированные вирусом холодные мишени Р-815, но не L-929 оказывали ингибирующее действие. Таким образом, популяция клеток Fx состоит из двух неперекрестно-реагирующих субпопуляций, одна из которых специфична к вирусу ЛХМ в ассоциации с молекулами H-2d, а другая специфична к вирусу ЛХМ в ассоциации с молекулами Н-2*.
Продолжение подобных экспериментов на рекомбинантных по Н-2 линиях мышей позволило выявить другое разделение специфичности цитотоксических Т-лимфоцитов. Считается, что мыши линии A/J (Kh, I-Ah, I-Jk, 1-Ек, 1-СЛ,
Sd, Dd) обладают естественным рекомбинантным гаплотипом МНС. Левая половина МНС этих мышей происходит от мышей с гаплотипом Н-2к, а правая — от мышей с гаплотипом Н-2?. Если таких мышей иммунизировали вирусом Л ХМ и через семь дней определяли цитотоксическую активность клеток селезенки, то полученные Т-лимфоциты лизировали модифицированные вирусом опухолевые мишени, как H-2h (L-929)-, так и H-2d (Р-815)-гаплотипа. Опыты по холодному конкурентному торможению показали, что лизис меченных 51Сг клеток L-929, инфицированных вирусом, может быть подавлен немечеными инфицированными вирусом клетками L-929 (H-2h), но не инфицированными вирусом немечеными клетками Р-815 (Н-21). Лизис меченных 51Сг клеток Р-815, инфицированных вирусом, подавлялся немечеными инфицированными вирусом клетками Р-815, но не инфицированными вирусом клетками L-929. Эти результаты доказывают, что специфичные к вирусу ЛХМ цитотокси-ческие клетки мышей состоят из двух независимых популяций: одной, специфичной к вирусу ЛХМ в ассоциации с молекулами Н-2к (по-видимому, К*), и другой, специфичной к вирусу ЛХМ в ассоциации с молекулами H-2d (по-ви-димому, Ld или Dd).
Предыдущая << 1 .. 67 68 69 70 71 72 < 73 > 74 75 76 77 78 79 .. 283 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed