Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
15.1.2. МНС-рестрикция взаимодействия Т-лимфоцитов и макрофагов
В опытах Каца (табл. 15.1 и 15.2) использовались неочищенные популяции Т- и В-лимфоцитов и клетки селезенки, либо облученные («Т»), либо обработанные антисывороткой к Thy-1 и комплементом («В»), Эти популяции могли содержать клетки других типов, участвующие в иммунном ответе. В частности, не была полностью исключена активность макрофагов, или антиген-презен-тирующих клеток, являющихся (Thy-1 )-отрицательными и относительно радио-резистентными. Это упущение исправили Розенталь и Шивах [7], показавшие, что взаимодействия макрофагов и Т-лимфоцитов действительно ограничены или рестриктированы продуктами генов МНС. Используя различающиеся по МНС инбредные линии морских свинок 2 и 13, эти авторы пытались вызвать пролиферацию иммунных Т-лимфоцитов одной линии в ответ на антиген, презентиро-ванный на поверхности макрофагов другой линии. В таких опытах по презентации антигена макрофаги неиммунных животных инкубировали с антигеном в течение 1 ч (нагрузка), отмывали от несвязавшегося антигена, облучали или инкубировали с митомицином С для подавления пролиферации клеток этой популяции. Затем макрофаги добавляли к иммунным Т-лимфоцитам (схема опытов приведена в гл. 5). Полученную смесь клеток культивировали от 72 до 120 ч и пролиферативный ответ Т-лимфоцитов измеряли по включению
в ДНК меченного тритием тимидина. Результаты этих экспериментов показали (табл. 15.3), что индуцированную антигеном пролиферацию Т-лимфоцитов можно получить только при использовании Т-лимфоцитов и макрофагов от животных одной линии (Д имп./мин — 25 ООО для линии 2 и —18 200 для линии 13). При использовании макрофагов от линии, не совпадающей по МНС (например,
Таблица 15.3. Значение макрофагов, сингенных по продуктам МНС, в индукции антигеном синтеза ДНК в иммунных лимфоцитах лимфатических узлов морских свинок (по [7])
Макрофаги Пролиферация Т-тгамфоцитов СКЛ (Д имп./мин) 2)
Линия Инкубация Т-лимфоциты линии 2 Т-лимфоциты линии 13 13 анти-2 2 анти-13
с антигеном
2 0 900 Д имп./мин 1) 5700 Д имп./мин 4000
2 + 26 400 25 500 8600 2900
13 0 4600 Д имп./мин 1700 Д имп./мин 3700 ---
13 + 3100 0 19 900 18 200
Fx(2 X 13) 0 1900 Д имп./мин 4300 Д имп./мин 1000 2600
Fj(2 X 13) + 12400 10 500 11800 75 000
') Д имп./мин - антиген-специфический ответ, определяемый как разность между стимуляцией Т-кле-ток нагруженными антигеном макрофагами и стимуляцией Т-клеток макрофагами, не нагруженными антигеном.
2) Реакция смешанной культуры лимфоцитов (CKJI) определяется как разность в стимуляции Т-лимфоцитов аллогенными и сингенными макрофагами в отсутствие антигена.
Т-лимфоциты линии 2 и макрофаги линии 13), антиген-специфическая пролиферация либо совсем не наблюдалась, либо лишь незначительно превышала контрольный уровень включения, когда использовали макрофаги, не нагруженные антигеном (Д имп./мин < 0). Следует отметить, что контрольный уровень включения в комбинации аллогенных клеток значительно выше, чем в случае сингенных клеток: например, при сочетании Т-лимфоцитов линии 13 и макрофагов линии 2 включение достигает 5700 имп./мин, тогда как при комбинации Т-лимфоцитов и макрофагов линии 13 — только 1700 имп./мин. Разница в 4000 имп./мин обусловлена пролиферативным ответом смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ), наблюдающимся при объединении аллогенных лейкоцитов. В пользу предположения, что низкий уровень антиген-специфической пролиферации в комбинации аллогенных клеток не связан с аллореактивностью, свидетельствуют опыты с использованием гибридов Fx. Макрофаги гибридов .Fi (2 х 13) были способны презентировать антиген Т-лимфоцитам линии 2 (Д имп./мин—10500) или линии 13 (Д имп./мин—7500), хотя и вызывали реакцию СКЛ (см. табл. 15.3, где ответ в СКЛ Т-лимфоцитов линии 13 анти-Fx составлял 1000 имп./мин, а в СКЛ линии 2 анти-Fj^ — 2600 имп./мин). На основании этих экспериментов Розенталь и Шивах [7] сделали вывод о необходимости совпадения аллельных вариантов МНС макрофага и Т-лимфоцита для эффективного взаимодействия этих клеток при индукции пролиферативного ответа. Эти исходные данные, полученные в опытах на морских свинках, были подтверждены и расширены исследованиями на мышах, генетика которых изучена более детально, что позволило картировать в I-А -субобласти МНС гены, рестрикти-рующие пролиферативный ответ на такие антигены, как ДНФ-овальбумин [8].
В последующих опытах по индукции хелперных Т-лимфоцитов антигеном и макрофагами in vitro Эрб и Фельдман (Erb, Feldman) выявили сходную генетическую рестрикцию продуктами генов субобласти I-А. Кроме того, в иссле-
