Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Дэвид Г. -> "Иммунология. Том 2" -> 62

Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.

Дэвид Г., Томас Дж. Иммунология. Том 2 — М.: Мир, 1987. — 456 c.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка): immunologiyat21988.djvu
Предыдущая << 1 .. 56 57 58 59 60 61 < 62 > 63 64 65 66 67 68 .. 283 >> Следующая

Ли и др. [74] выделяли мРНК из HLA-DR-положительной линии лимфо-бластоидных В-клеток человека, трансформированных вирусом Эпштейна— Барр. Фракцию мРНК, имеющую молекулы определенного размера, использовали для синтеза кДНК, которую затем встраивали в плазмиды. Был произведен отбор плазмид, способных гибридизироваться с мРНК, осуществляющей синтез продуктов DR в бесклеточной системе трансляции. Продукты HLA-DR преципитировали из системы трансляции с помощью гетерологичной антисыворотки против HLA-DR и определяли молекулярную массу транслированных белков в ДСН-ЭПАГ. В результате такого подхода исследователям удалось выделить два клона кДНК (pDR HI и pDR Н2), кодирующие тяжелую цепь HLA-DR.
В пользу утверждения, что эти клоны кодируют тяжелую цепь HLA-DR, свидетельствует следующее обстоятельство: мРНК, способная к гибридизации с клонами pDRH, присутствовала в В-лимфоцитах и не выявлялась в фибро-бластах и Т-лимфоцитах. Таким образом, экспрессия мРНК совпадала с экспрессией HLA-DR клетками конкретного типа. Кроме того, была определена частичная нуклеотидная последовательность 5'-конца одного из клонов. Эта последовательность и соответствующая последовательность аминокислот приведены в табл. 14.11. Теоретически выведенная последовательность аминокислот была идентична последовательности белка альфа-цепи, полученной в другой лаборатории, и гомологична известным последовательностям альфа-цепи (табл. 14.12).
Клоны pDRH гибридизировались с ДНК гибридов соматических клеток мыши и человека, содержавших хромосому 6 человека, и не гибридизировались с ДНК гибридов, утративших эту хромосому. Было показано, что комплекс HLA картируется в коротком плече хромосомы 6. Хотя конкретный сегмент хромосомы, реагировавший с клонами pDRH, не был идентифицирован, полученные данные позволяют предполагать, что гены, кодирующие альфа-цепь HLA-DR, расположены в области HLA.
С помощью блоттинга по Саузерну в ДНК линии клеток человека, гидролизованной EcoRI, была обнаружена полбса, соответствующая молекулам длиной 3,4 т.п.н.; при анализе ДНК соматических гибридов человека и мыши, имевших хромосому 6 человека, наряду с этим фрагментом выявлялся еще один, размером 3,1 т.п.н. Оба фрагмента выявлялись в ДНК человека, обработанной рестриктазой Hindlll. Такое простое распределение по рестрикционным фрагментам дает основание полагать, что в геноме содержится очень мало копий гена тяжелой цепи HLA-DR.
Кормэн и др. [73] также получили клоны к ДНК, по-видимому соответствующие генам тяжелых цепей HLA-DR. Эти исследователи применили метод иммуноселекции полисом с помощью моноклональных антител, реагирующих со свободными тяжелыми цепями HLA-DR, для выявления препаратов, обо-
Таблица 14.12. N-концевая белковая последовательность и 5'-концевая нуклеотидпая
Не Lys Glu Glu His Val lie lie Gin
5' ... АТС AAA GAA GAA CAT GTG АТС АТС GAG
тащенных молекулами мРНК тяжелой цепи. Были получены два клона кДНК, обозначенные pDR Н-1 и pDR Н-2; оба клона, видимо, содержат З'-нетрансли-руемый район. Один клон содержит последовательности, которые, вероятнее всего, соответствуют С-концевому гидрофильному внутриклеточному участку и части гидрофобной трансмембранной области.
Лархэммер и др. 175] сообщили о полной расшифровке последовательности клона кДНК, видимо кодирующей бета-цепь DR. В табл. 14.13 аминокислотная
Таблица 14.13. Сравнение последовательностей бета-цепей DR
I г з 4 5
RDSPEDFVYQFKGMCYFTNGTERVrtLVSRSIYNREEVVRFDSDVGEFRAV G-TRPR-LW-P-RE-H-F---------FLD-YF--Q--S--------------
6 7 8 9 10
TLLGLPAAEYWNSQKDILERKRAAVDRVCRHNYOLELRTTLORRVEPTVT -E--R-D-------------QA-----TY------GVVESF-V-----Q-K--
II 12 13 14 15
ispsrtealnhhnllvcsvtdfypaqikvrwfrndqeetagwstplirn
VY — K-QP-Q---------SG---GS-E------L-G--K--M----G--QD
16 17 18 19
GDWTFQI LVMLEMTPQRGDVYTCHVEHPSLQSP I TVEMRAQSESAQSKM i1
------T-----TV-RS-E------Q-----VT--L------R--------- j
20 21 22 I
LSG IGGFV LGL I FLGLGL It HHRSQKGLLH f
1 Положения аминокислот представлены в соответствии с последовательностью ДНК и не отражают вставки.
2 Аминокислотная последовательность была определена теоретически 'на основе последовательности клонированной ДНК; из работы Лархэммера и др. [30].
3 Последовательность белка приведена из работы Крацина [61].
последовательность, установленная на основе нуклеотидной последовательности [ ДНК, сопоставляется с аминокислотной последовательностью соответствующего j белка — бета-цепи DR-2 (см. табл. 14.8). Для получения максимальной гомоло- [ гии потребовалась вставка одной аминокислоты в белковую последовательность. | Поскольку клон кДНК был получен из гетерозиготной клеточной линии j (DR4,w6), различия в последовательностях, связанные с аллельной вариабель- S ностью, можно было предвидеть. Однако гомология между последовательностью f реального белка и теоретически полученной аминокислотной последователь- S ностью составляет лишь 68%, т. е. величину, гораздо меньшую, чем гомология j между разными аллельными вариантами молекул класса I. Поэтому можно { предположить, что эти две последовательности бета-цепей представляют разные подклассы молекул класса II. Следует отметить, что последовательность ами- | нокислот, выведенная из последовательности ДНК, и последовательность реаль- [ ного белка идентичны в участке из 9 аминокислот, который, судя по резуль- [ татам секвенирования белков, является вариабельным. !
Предыдущая << 1 .. 56 57 58 59 60 61 < 62 > 63 64 65 66 67 68 .. 283 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed