Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
В реакциях с гомозиготными типирующими клетками (ГТК) выявляется [ двенадцать аллелей HLA-D; ГТК — это лимфоциты доноров, получивших с одинаковые аллели D от обоих родителей. Лимфоциты лиц, имеющих такой же ! аллель Z>, не «узнают» ГТК как чужеродные и не пролиферируют в СКЛ, в то ± время как клетки с другими аллелями реагируют на ГТК пролиферацией | в СКЛ. Интерпретация результатов типирования HLA-D может быть очень , сложной и требует строгого статистического анализа.
С помощью серологических реакций выявляется десять аллелей HLA-DR. t Популяции клеток, обогащенные В-лимфоцитами, тестируют в комплемент-зависимой лимфоцитотоксической реакции, используя аллоантисыворотки, \ получаемые, как правило, от многократно рожавших женщин. Антисыворотки | против HLA-DR обычно имеют низкий титр и часто содержат также антитела | против HLA-A,B,C. Эти антитела необходимо удалять абсорбцией на тромбо- ¦ цитах, не экспрессирующих антигены HLA-DR. f
Получение реагентов для антигенов человека резко отличается от ситуации | в мышиной системе, где можно провести иммунизацию против интересующих < исследователя конкретных участков области H-2I. Специфичность антисыво- | роток против HLA-DR выясняют в результате тестирования на больших пане- | лях В-лимфоцитов, полученных от разных доноров, в том числе от членов семьи. | Помимо сывороток, реагирующих с продуктами аллелей 1—10 системы { HLA-DR, было выявлено и охарактеризовано несколько групп сывороток, I реагирующих определенным образом с множеством специфичностей HLA-DR. Определяемые этими сыворотками детерминанты были, обозначены как серии : антигенов MB и МТ. Антигены MB, по-видимому, представляют собой аллельную серию, в то же время антигены МТ по современным данным, видимо, не являются аллельными.
Для первоначальной характеристики антигенов класса II человека была использована гетерологичная антисыворотка, полученная путем иммунизации кролика частично очищенной фракцией солюбилизированных папаином анти- ; генов HLA от В-лимфобластоидной линии клеток. После тщательной абсорбции Т-клетками сыворотка теряла способность реагировать с ними, но реагировала с В-клетками и преципитировала молекулы класса II, построенные из тяжелой (альфа) (мол. масса 34 кДа) и легкой (бета) (мол. масса 28 кДа) цепей. Сыворотка также сильно ингибировала ответ в CKJI. В последующих исследованиях антигенов класса II человека использовались гетероантисыворотки, моноклональные антитела и аллоантисыворотки. Гетероантисыворотки и большинство
моноклональных антител выявляют мономорфные детерминанты и поэтому реагируют с В-лимфоцитами всех типов DR. Уточнение взаимосвязей между молекулами, определяемыми этими антителами против мономорфных структур, и молекулами, несущими аллельные специфичности и определяемыми с помощью аллоантисывороток, представляет непростую задачу.
14.3.2.1. Первичная структура антигенов DR
Ввиду перечисленных трудностей на пути изучения молекул класса II человека представляется особенно замечательным успешное определение полной последовательности 198 аминокислотных остатков N-конца бета-цепи, В лаборатории Хилыпмана [61] с помощью главным образом биохимических методов были осуществлены выделение и очистка альфа-и бета-цепей HLA-DR из лимфо-бластоидной линии клеток, полученных от донора, гомозиготного по HLA-Dw2/DR2. Хотя для антигенной характеристики выделенных продуктов не были использованы аллоиммунные сыворотки, эти продукты предположительно содержали молекулы HLA-DR. Молекулярные комплексы HLA-DR получали с помощью двуступенчатой процедуры, используя вначале ионообменную, а затем гель-фильтрационную хроматографию. Разделение альфа- и бета-цепей из комплексов HLA-DR проводили на колонке гидроксилапатита.
Таблица 14.8. Сравнение аминокислотной последовательности бета-цепи HLA-DR2 второго и третьего внеклеточных доменов HLA-B7 *)
1 2 3 4 5
GDTRPRFLWQPKRECHFFNGTERVRFLDRYFYNQEESVRFDSDVGEFRAV
QSEAGSHT L - SMYG-DVGPDGRLL-GH-Q-A.-OGKOYI ALNE-LRSWT-A 9 10 11 12 13
6 7 8 9 10
telgrpdaeywnsqkdileqaraavdtycrhnygvvesftvqrrvqpkvt
(jDTAAQl TQRKWEAAREA--R--YLEGE-VEWLRRYLENGKDKLERADPP 14 15 16 17 18
11 12 13 U 15
(IVYPSKTQPLOHHNLLVCSVSGFYPGSIEVRWFINGQEEKAGMVSTGLIQD
KTHVTHHPlSO- EAT-R-WAL----AE-TLT - QRD - EDQTQ D T ELVETRPA
19 20 21 22 23
16 17 18 19 20
GDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSVTSPLTVEWRARSESAQSKM
--R--EKWAAVVVPSGEEQR---H-Q-EGLPK---LR-EPS-Q-T VP V
24 25 26 27 28
') При сопоставлении последовательности располагают так, чтобы совместить гомологичные остатки Cys. Черточки (-) обозначают гомологию с DR2скобки [ ] обозначают вставки, использованные для получения максимальной гомологии.
*) Этот антиген был выделен из клеточной линии, полученной из клеток донора, гомозиготного по HLA-Dw2/DR2. Представленная последовательность является последовательностью большей части (70%) изученной бета-цепи [61].
