Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Дэвид Г. -> "Иммунология. Том 2" -> 49

Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.

Дэвид Г., Томас Дж. Иммунология. Том 2 — М.: Мир, 1987. — 456 c.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка): immunologiyat21988.djvu
Предыдущая << 1 .. 43 44 45 46 47 48 < 49 > 50 51 52 53 54 55 .. 283 >> Следующая

Тяжелую (45 кДа) цепь антигена TL выделили с помощью иммунопреципи- | тации. Затем методом пептидных карт сравнивали ее с цепями антигенов Н-2К. При этом было показано, что родство антигена TL антигену Н-2К выражено слабее родства Н-2К другим антигенам гистосовместимости. Поэтому для анти- 5 гена TL не была выявлена та сравнительно высокая степень гомологии с Н-2К, * чоторая обнаружилась при сравнении антигенов Н-2К и Qa. Расчеты, основанные на количестве общих для TL и H-2Dd пептидов, указывают на приблизи-ельно 21%-ный уровень пептидной гомологии. Следует, однако, предупредить читателя, что эта оценка получена при анализе лишь трех сходных пептидов из общего числа 25 пептидов обеих молекул и поэтому здесь возможна значи- \ тельная ошибка. Несмотря на вероятную неточность оценки, можно все же > сделать вывод, что антигены TL состоят в наиболее далеком родстве с другими продуктами класса I мыши.
14.2.4. Мутантные антигены мыши и человека [4]
Мутации антигенов класса I в ряде случаев выявились с помощью биологических тестов. Эти мутации оказались удобным инструментом для изучения конкретной взаимосвязи между функциями и различными продуктами локусов МНС. Используя мутации, можно определять тонкие корреляции между структурными различиями и наблюдаемыми функциональными изменениями. Антигены Н-2 мыши — это наиболее тщательно изученная система мутантов, в особенности это касается области К гаплотипа Ъ. Имеются также данные об антигенах HLA, не дифференцируемых серологическими методами, но проявляющих значительные различия в реакциях с цитотоксическими лимфоцитами. Структурный анализ молекул, селектированных по признаку функциональных особенностей, является одним из самых эффективных путей изучения взаимосвязи между структурой и функцией различных субрайонов молекул МНС класса I.
14.2.4.1. Мутанты Н-2 мыши
Методика перекрестной трансплантации между родителями и потомством позволила выявить ряд мутантов, возникших в инбредных линиях мышей. 17 из 26 выявленных к настоящему времени спонтанных мутаций были картированы в гене Н-2КЬ. В результате было постулировано, что этот ген является самым мутабельным из известных генов млекопитающих. Определение полной первичной структуры молекулы Кь позволило детально исследовать мутантные продукты путем сравнительного структурного анализа.
В исследованиях, обеспечивших расшифровку структуры Кь, молекулу обрабатывали бромцианом (CNBr), под действием которого происходит расщепление пептидной цепи по остатку метионина со стороны С-конца. Бромциа-новые пептиды разделяли гель-фильтрацией и определяли их структуру путем секвенирования N-концевых последовательностей и дальнейшего расщепления на более мелкие пептиды с помощью протеолитических ферментов. При изучении структуры мутантов Кь Нэирн и др. [5] получали бромциановые пептиды и сравнивали их с аналогичными пептидами «родительской» молекулы, используя карты триптических пептидов, полученные методом ионообменной хроматографии. Такая технология позволяет точно локализовать имеющиеся различия, не проводя дополнительной работы по определению полной последовательности каждой мутантной молекулы. Поскольку при картировании использовали триптические пептиды, в молекулу предварительно вводили радиоактивную метку по аргинину и лизину. Кроме того, в качестве метки использовали радиоактивный метионин, так как каждый бромциановый пептид должен после обработки трипсином оканчиваться метионином на С-конце. Зная характер распределения пептидов, получаемых при обработке «родительской» молекулы Н-2КЬ, можно было указать точную локализацию пептидов, отсутствующих или измененных в мутантной молекуле. Анализу такого рода были подвергнуты 10 различных мутантных молекул. Полученные результаты суммированы на рис. 14.5 и в табл. 14.5. Любой мутант отличается от «родительской» молекулы не более чем по двум аминокислотам; все мутации сосредоточены в N-концевой части молекулы. Некоторые мутанты имеют замены в одинаковых положениях. Анализ полученных результатов не свидетельствует в пользу сдвига рамки считывания или появления нонсенс-мутаций; большинство изменений, найденных у мутантов Н-2КЬ, ближе всего соответствуют категории точковых мутаций. Исключение составляет мутация КЪт1, при которой каждая из двух аминокислотных замен обусловлена заменой двух оснований в соот-
ветствующих нуклеотидных триплетах. Все прочие известные замены аминокислот соответствуют единичным заменам нуклеотидных оснований.
Как уже отмечалось, перечисленные мутации были обнаружены в тесте ¦отторжения трансплантата кожи. Помимо этого у ряда мутантных линий были
bm Зн bm 11 ь
bm I н
bm 5ь bm 16»-
bm 6ь bm 7>-bm 9»-
bm 8н-ЬтЮн-
О
X
u
]___г
-ss-
О
X
о
HpNffllnl Шо I Ib
la
SS-
Папаин
r~ir
Цсоон
-и-
Рис. 14.5. Схематический план структуры молекулы Н-2КЬ, показывающий положения аминокислотных замен у мутантов по Н-2КЬ.
Номера положений, в которых произошли замены, указаны в табл. 14.5. ([5]; печатается с разрешения.)
Предыдущая << 1 .. 43 44 45 46 47 48 < 49 > 50 51 52 53 54 55 .. 283 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed