Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
В связи с отсутствием доступных антиген-специфических клонированных линий нормальных В-клеток, зависимых от фактора роста, в последнее время исследователи, работающие с ФДВК, обратились к линиям раковых или трансформированных вирусом Эпштейна — Барр В-клеток как к источнику гомогенных клеток-мишеней для определения ФДВК. Хотя следует соблюдать осторожность при оценке физиологической роли лимфокинов на основании таких экспериментов, в которых клетками-мишенями служат трансформированные лимфоциты, такой подход позволяет избежать сложностей, с которыми приходится сталкиваться при использовании нормальных В-лимфоцитов, часто загрязненных другими типами клеток.
Недавно Пэйдж и др. [75] опубликовали данные о применении раковых клеток для определения ФДВК, функция которых, видимо, заключается в переключении механизма сплайсинга РНК, что необходимо для изменения соотношения синтезируемых мембранной и секретируемых [i-цепей. Было показано, что при добавлении супернатантов, полученных от специфических, стимулированных антигеном клонированных Т-хелперов, к клеткам мышиной линии WEHI-279.1, имеющим на поверхности IgM, в течение 24 ч происходит пере-
-) Японскими учеными был клонирован ген дифференцировочного фактора (BSF-2, или BCDF), вызывающего секрецию антител преактивированными В-клетками человека [105]. Полипептидная цепь белка состоит из 184 аминокислотных остатков. Данный лимфокин имеет заметную гомологию только с фактором, стимулирующим рост колоний гранулоцитов человека (G-CSF). Ростовой активностью этот лимфокин не обладает. — Прим. перев.
ключение биосинтеза ц-цепи с мембранной на секреторную форму. Кроме того, за этим переключением следовало увеличение доли IgM-секретирующих клеток. Поскольку величина изменений зависела от количества добавленного супернатанта, подобная система тестирования пригодна для идентификации и выделения продуцируемого Т-лимфоцитами ФДВК. Следует отметить, что началу активной секреции должен предшествовать посттрансляционный процессинг ц-цепи, который можно проследить по появлению внутриклеточных ц-цепей размером 70 кДа. Этот процесс также может зависеть от ФДВК.
В других опытах в качестве клеток-мишеней факторов дифференцировки, осуществляющих переключение биосинтеза с мембранного на секретируемый IgM, использовались свежевыделенные раковые В-клетки мыши или человека. Айсаксон и др. [76] с помощью пассируемых in vivo клеток BCLl5 напоминающих человеческие клетки XJIJI, обнаружили, что супернатанты от культур клеток селезенки, стимулированных лектином или аллоантигеном, содержат факторы дифференцировки, вызывающие секрецию IgM. Используя антиидио-типическую антисыворотку к идиотипу BCLj-клеток, удалось показать, что именно BCLj-клетки, а не нормальные В-лимфоциты, загрязняющие культуру, являлись мишенями в данной тест-системе. Аналогичные результаты опубликовали Йошидзаки и др. [70], работавшие с человеческим XJIJI-клетками, полученными от больного, у которого в сыворотке присутствовал моноклональный IgM. Использованием антиидиотипической антисыворотки для активации XJIJI-клеток было обнаружено, что частично очищенная кондиционированная среда, полученная стимуляцией лимфоцитов миндалин лектином, содержала молекулы размером 20 кДа, вызывающие секрецию IgM и небольших количеств IgG, несущих специфический идиотип.
В настоящее время неясно, существует ли только один или несколько различных факторов дифференцировки В-клеток — таким образом, что все этапы дифференцировки в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины, находятся под полным контролем продуцируемых Т-клетками лимфокинов. Не исключено, что некоторые из сигналов, вызывающих секрецию тяжелой цепи определенного класса, передаются внутриклеточно и не зависят от Т-клеток. Вполне возможно, что по мере прохождения клеткой различных стадий дифференцировки на поверхности появляются рецепторы, специфичные к определенному фактору дифференцировки В-клеток. В этом случае фенотипические характеристики клеток-мишеней, используемых для тестирования этого фактора, могут определить молекулярные свойства изучаемого ФДВК. Особенно полезными при изучении свойств ФДВК и при проверке предположения о существовании нескольких В-клеточных факторов дифференцировки могут быть трансформированные В-клеточные линии, имеющие определенный фенотип поверхностного иммуноглобулина. Например, Мурагучи и др. [77] показали, что кондиционированная среда от стимулированных лектинами мо-нонуклеарных клеток вызывает у трансформированной вирусом Эпштейна — Барр линии человеческих В-клеток (CESS), имеющих поверхностный IgG, секрецию исключительно IgG. Остается невыясненным, аналогичен ли ФДВК, выявляемый в данной тест-системе, фактору дифференцировки, описанному Пэйджем и др. [75] и вызывающему секрецию IgM у клеток, имеющих поверхностный IgM. В принципе этот вопрос можно было бы решить, поскольку клетки CESS способны абсорбировать из супернатанта молекулы с активностью, обусловливающей секрецию IgG. И в этом случае эксперименты по адсорбции факторов представляют определенный интерес, так как дают основание предполагать, что механизм взаимодействия ФДВК с В-клетками аналогичен взаимодействию IL-2 с IL-2-специфическими рецепторами. Поэтому можно надеять-
