Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Кроме того, было обнаружено, что в спленоцитах бестимусной мыши есть клетки, отвечающие на IL-2 [63] и способные при получении соответствующего активирующего сигнала дифференцироваться в зрелые цитолитические и хелперные Т-клетки [63, 64]. С установлением этих факторов стало очевидным, что эксперименты, предпринятые для определения активности ТЗФ, могли на самом деле демонстрировать вызываемый IL-2 клональный рост Т-хелперов. На основе этих данных в сочетании с данными о том, что пролиферация и ди-ференцировка Т-клеток контролируются лимфокинами, были разработаны методы, с помощью которых можно было обнаруживать и характеризовать лимфо-кины, участвующие в В-клеточном иммунном ответе.
Как и при выяснении роли отдельных лимфокинов в Т-клеточном ответе, основная сложность работы с В-клеточными системами состоит в том, что доступные источники лимфокинов (как правило, это кондиционированная среда от стимулированных лектинами лимфоцитов) содержат сложную смесь разнообразных молекул. Кроме того, очень непросто получить гомогенную популяцию В-клеток без примесей Т-лимфоцитов, что сделало бы возможным однозначную интерпретацию результатов.
21.2.2. Фактор роста В-клеток
В течение последних двух лет было опубликовано несколько сообщений о том, что В-клеточная пролиферация вызывается фактором роста В-клеток (BCGF). Возможность поддерживать длительную пролиферацию культур человеческих [65] и мышиных [66] В-лимфоцитов с помощью кондиционированной
среды от стимулированных мононуклеарных клеток явилась первым свидетельством роли растворимых факторов в пролиферации В-клеток. Как и в случае поддерживаемого кондиционированной средой роста Т-клеток, длительная пролиферация В-лимфоцитов не требует повторного воздействия антигена на иммуноглобулиновые рецепторы. Этот факт убедительно свидетельствует о том, что митоз В-клеток запускается независимым от антигенного стимула сигна-лом(ами). Несмотря на первые обнадеживающие эксперименты, длительно поддерживаемые культуры и клоны В-клеток не получили широкого распространения главным образом потому, что не были определены оптимальные условия роста В-лимфоцитов. Кроме того, большинство исследователей столкнулось с проблемой преимущественного роста в культурах Т-клеток, особенно если в качестве источника фактор роста В-клеток применялась кондиционированная среда, содержащая IL-2.
Для того чтобы компенсировать отсутствие стабильных, клонированных линий В-лимфоцитов, в качестве клеток-мишеней при определении фактора роста В-клеток стали использовать высокоочищенные нормальные В-клетки или трансформированные В-клетки. В тест-системе на этот фактор, которую разработали Ховард и др. [67], использовались мышиные спленоциты, из которых были удалены Т-клетки. Удаление Т-клеток проводили обработкой in vivo антитимоцитной сывороткой и последующим комплементзависимым лизисом оставшихся Т-лимфоцитов in vitro в присутствии различных антител к специфическим поверхностным маркерам Т-клеток. Были удалены и прилипающие клетки, так что конечная популяция состояла на 98—99 % из клеток, имевших поверхностные иммуноглобулины. Для определения фактора роста В-клеток их культивировали при относительно низкой концентрации (2,5 -105 клетка/мл) с различными разведениями кондиционированной среды, предположительно содержащей данный фактор. В отсутствие активирующих сигналов, затрагивающих поверхностные иммуноглобулины, пролиферативного ответа на фактор роста В-клеток не наблюдалось. Пролиферация не шла и при стимуляции клеток анти-^-антителами в отсутствие фактора роста В-клеток. Таким образом, как и Т-лимфоциты, В-клетки необходимо было активировать, прежде чем они приобретали способность отвечать на фактор роста.
Аналогичные данные опубликовали и другие исследователи: Мурагучи и Фауци [68], которые использовали обогащенные В-клетками лимфоциты человека, активированные анти-^-антителами или стафилококковым белком А; Форд и др. [69], также использовавшие обогащенные В-клетки человека, и Йошидзаки и др. [70], изучавшие трансформированные клетки, полученные от больного с хроническим лимфоцитарным лейкозом (XJIJI). Представляет интерес впервые описанный Фу и др. [71] факт, согласно которому только у тех больных XJIJI, в сыворотке которых присутствует моноклональный иммуноглобулин, есть трансформированные клетки, способные отвечать на фактор роста В-клеток. С помощью антиидиотипических антисывороток, а также Fab2- и Fab-фрагментов было показано, что клетки XJIJI приобретают способность отвечать на исследуемый фактор только под действием двувалентных антиидиотипических антител [70].
Первые исследования, предпринятые для выяснения роли растворимых факторов в активации, пролиферации и дифференцировке В-клеток, где конечным этапом тестирования было выявление антителообразующих клеток, показали, что в культуре обязательно должен содержаться IL-2 [72]. Эти данные расценили как подтверждение непосредственного воздействия IL-2 на В-клетки, поскольку в начале культивирования бралась высокоочищенная популяция В-лимфоцитов. Однако позднее с помощью Т-клеточных гибридом, продуцирую-
