Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
циональной взаимосвязи IL-1 и IL-2 и когда выяснилось, что присутствие этих лимфокинов обязательно для роста клонов Т-клеток, было высказано предположение, что секретируемая Т-хелперами активность, называемая хелперным фактором киллеров (КХФ, KHF) или фактором, индуцирующим цитотоксические клетки, обеспечивается суммарной рост-стимулирующей активностью IL-1 и IL-2.
В ходе этих исследований, впоследствии подтвержденных и углубленных исследованием предшественников цитолитических Т-клеток (ПЦТК) с помощью метода лимитирующих разведений и изучения цитолитической активности клонированных лимфоцитов [60], не было получено данных, указывающих на присутствие какого-либо фактора, влияющего на дифференцировку цитолитических Т-клеток. Оглядываясь, однако, назад, нетрудно увидеть, что эти данные не исключали существования фактора дифференцировки, необходимого для появления функционально активных цитолитических Т-клеток, поскольку во всех упомянутых исследованиях использовались неочищенные лимфокины.
Опубликованные недавно результаты работ Раулета и Бевана [51] и Кэйеда и др. [52] показывают, что вывод об отсутствии цитотоксического фактора дифференцировки (ЦФД, CDF), возможно, был преждевременным. Раулет и Беван [51], используя в качестве источника IL-2 кондиционированную среду не от нормальных клеток, а от стимулированной лектином Т-клеточной гибридомы, обнаружили, что в отсутствие вспомогательных клеток Lyt 2+-Г1ЦТК пролиферируют, но не дифференцируются в цитолитические клетки-эффекторы. Цито-литическая активность появлялась лишь после добавления кондиционированной среды от нормальных клеток. Из этих данных был сделан вывод, что в супернатанте от Т-клеточной гибридомы нет фактора, необходимого для дифференцировки ЦТЛ (CTL), продуцируемого нормальными мононуклеарными клетками. Чтобы доказать существование и изучить свойства ЦФД, требуются дальнейшие исследования, но уже сейчас имеет смысл критически оценить ход рассуждений, имевших место в этом случае. Наличие в клеточном супернатанте одной измеряемой активности не исключает присутствия других активностей, действующих на популяцию клеток-мишеней.
Факторы дифференцировки, необходимые для образования функционально активных хелперных и супрессорных Т-клеток, еще не известны. Однако, если будет доказано участие ЦФД в дифференцировке цитолитических Т-лимфоцитов, поиск новых факторов дифференцировки может стать в будущем важным направлением исследований. Как будет ясно из последующих разделов, уже имеются данные о существовании фактор а (ов), участвующего (их) в дифференцировке В-клеток.
21.2. Лимфокины и В-клеточньш иммунный ответ
21.2.1. Исторический очерк
Вскоре после того, как Мишел и Даттон [53] разработали 15 лет назад методы культивирования клеток, с помощью которых можно было получать антителообразующие клетки in vitro, были проведены эксперименты, показавшие, что для развития В-клеточного ответа необходимы Т-лимфоциты [54]. Были сделаны попытки выяснить, каким образом Т-лимфоциты способствуют возникновению антителообразующих клеток. В результате было сделано предположение, что Т-клетки можно заменить супернатантами от активированных лектинами (или антигенами) Т-клеток [55]. Поскольку подобные супернатанты действительно обладали способностью заменять Т-лимфоциты, появилась гипо-
теза о существовании фактора, заменяющего Т-клетки (ТЗФ, TRF). На основании ранних данных о том, что для оптимального ответа нужно через 48—72 ч. после начала культивирования добавлять содержащий ТЗФ супернатант [56— 59], было высказано предположение, что «поздно действующий» ТЗФ дает сигнал, требующийся для дифференцировки В-бластов в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины. Значительно меньше внимания уделялось пролиферации В-клеток, следующей за их активацией антигеном. Объяснялось это главным образом тем, что конечный этап практически всех В-клеточных тест-систем включал определение клеток, образующих бляшки (БОК). Кроме того, вследствие недостаточного развития методов удаления макрофагов не была изучена роль макрофагов в В-клеточном ответе.
Еще три года назад в качестве удобного источника препаратов В-лимфоцитов, не содержащих Т-клеток, использовались спленоциты бестимусной (пи/пи) мыши [58]. Многочисленные исследования показали, что у этих животных отсутствуют зрелые, функционально активные Т-клетки. Поэтому к спленоцитам бестимусной мыши добавляли антиген (гетерологичные эритроциты), кондиционированную среду, содержащую ТЗФ, и через 4—5 дней культивирования подсчитывали число БОК. Следует также отметить, что до последнего времени для получения in vitro антителообразующих клеток (АОК) приходилось культивировать клетки в условиях, весьма далеких от физиологических; плотность спле-ноцитов в культуре была очень высокой (107 клетка/мл), а ответ наблюдался лишь при добавлении некоторых партий сыворотки плода коровы. Главным образом благодаря разработке Исковым и др. [60, 61] среды, не содержащей сыворотки, и появлению метода лимитирующих разведений, позволяющего фиксировать уровень Т-клеточной помощи и число макрофагов, удалось выяснить, что одним из критических параметров является число хелперных Т-клеток: именно это обусловливало необходимость создания высокой плотности клеток и подбора партий сыворотки [62].
