Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Вальдман и сотрудники [92—95] также провели серию экспериментов, в которых методом лимитирующих разведенийисследовалифункциюрадиорези-
стентности Т-хелперов. В результате совместного культивирования популяции иммунных к ТНФ- В-лимфоцитов, из которых были удалены Т-клетки, и ограниченного числа облученных Т-клеток, лишенных В-лимфоцитов, эти исследователи пришли к следующим выводам: а) существуют два типа Т-В-взаимодей-ствий, а именно специфическое (когнатная помощь) и неспецифическое (поликлональная помощь); б) специфические хелперные Т-клетки являются «моногамными» в том смысле, что одна хелперная Т-клетка может взаимодействовать только с одним В-лимфоцитом, который продуцирует антитела определенного изотипа и специфичности; в) неспецифические хелперные Т-клетки в отличие от специфических способны взаимодействовать по меньшей мере с двумя В-лимфоцитами; г) специфическая хелперная клетка рестриктирована по Н-2, тогда как неспецифический хелперный эффект вызывают МНС-нерестриктированные хелперные факторы. Рассчитанная частота БЭ-специфических хелперных Т-клеток, индуцирующих первичный ответ на БЭ, составляла 1 на 12 500 клеток (8/105). Частота Т-клеток, участвующих в неспецифической кооперации при развитии ответа на эритроциты осла (ЭО), была в два раза меньшей. В случае клеток селезенки, примированных KLH, вычисленная частота специфических Т-хелперов при ответе на ТНФ-КЬН составляла 1/105. Значительно более высокая частота KLH-специфических хелперных Т-клеток, способных в присутствии KLH неспецифически стимулировать ответ на БЭ, достигала 4/105 (облученных) и 7/105 (необлученных) клеток селезенки, стимулированных KLH.
Эйхманн и др. [96] исследовали частоту предшественников в популяции иммунных Т-клеток селезенки методом лимитирующих разведений. В этих экспериментах Т-клетки были стимулированы конканавалином А и культивировались в среде, содержащей IL-2 (фактор роста Т-клеток, TCGF), для последующего анализа частоты хелперных Т-клеток в этой неиммунной, поликлональной, активированной Т-клеточной популяции. Ограниченное число Т-клеток, выросших в этих условиях, затем культивировали с В-лимфоцитами в присутствии специфического антигена, ТНФ-модифицированных бактерий стрептококка А и определяли зависимость числа положительных культур, образующих антитела против ТНФ, от числа внесенных Т-клеток. При определении частоты предшественников Т-хелперов, специфичных к стрептококку А, статистический анализ показал два различных распределения, так что были построены две кривые. Данные анализа с использованием различных концентраций Т-клеток мышей А/J и A.SW представлены на рис. 18.6. Значения частоты предшественников, полученные при добавлении большего количества Т-клеток, составили 1 на 15 ООО клеток (7/105) для A.SW и 1 на 30 ООО клеток (3/105) для А/J. Если же добавлялось малое число Т-клеток порядка 103 клеток на культуру, установленная частота Т-хелперов была равна 1/1500 (7/104) для A.SW и 1/3000 (3/104) для А/J. Доля положительных культур снижалась с увеличением числа добавленных Т-клеток, что говорит о влиянии супрессорных клеток. Таким образом, эти данные продемонстрировали наличие двух субпопуляций хелперных Т-клеток, специфичных к стрептококку А: популяции Т-клеток, встречающейся с высокой частотой, и популяции Т-клеток, встречающейся с низкой частотой. Клетки первой популяции оказались Lyt-1, 2, 3+ и были представлены с частотой 1/1000—1/6000 у мышей A/J, A.SW и гибридов Fx данных линий. Эти хелперные Т-клетки чувствительны к влиянию Т-супрессоров. Редко встречающиеся Т-хелперы относились к субпопуляции клеток Lyt-1+ и присутствовали с частотой от 1/10 000 до 1/70 000. Эти последние хелперные Т-клетки были нечувствительны к действию супрессорных клеток. Авторы постулировали, что популяция, встречающаяся с высокой частотой, содержит предшественники первичных хелперных клеток, тогда как популяция, ветре-
чающаяся с низкой частотой, содержит хелперные Т-клетки памяти, уже активированные антигеном. Они предположили, что некоторые из часто встречающихся Т-хелперов в действительности являются идиотип-специфическими, а не антиген-специфическими. Неспецифические хелперные Т-клетки в этой экспериментальной системе не выявлялись. Уотсон [97] также использовал систему микрокультивирования, в которой CTh наращивали в присутствии
Рис. 18.6. Анализ методом лимитирующих разведений частоты ,Т-хелперов, кооперирующих с В-лимфоцитами при ответе на ТНФ-стрептококк А.
Т-клетки, активированные Кон А, выра щивали в течение недели в присутствии фактора роста Т-клеток и определяли хел-перную активность при культивировании ограниченного числа Т-клеток с В-лимфоцитами в присутствии конъюгата ТНФ-стрептококк А. Теоретические основы метода и сделанные выводы описаны в тексте.
Число клеток на культуру х Ю"*
0 2 4 6 8
фактора роста Т-клеток с последующим совместным культивированием с клетками селезенки бестимусных мышей. Он обнаружил независимую индукцию Т-хелперов с различной МНС-рестрикцией.
