Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
3) По возможности всегда следует готовить большие партии стандартных растворов (при условии, что материал стабилен при существующих условиях хранения). Поскольку пипетирование иа каждом этапе сопровождается определенной ошибкой, две серии стандартов, приготовленные в разное время из одних и тех же исходных материалов, никогда не могут быть идентичными. Частая замена стандартов неизбежно будет приводить к увеличению разброса результатов анализа (см. ниже), а также к регулярному смещению величин, характеризующих качество анализа. Практически задача состоит в том, чтобы приготовить серию стандартных растворов в таких количествах, чтобы их хватило не менее чем иа одни год. Эти партии растворов в свою очередь должны готовиться из некоторого стандарта — исходного концентрированного раствора известной концентрации, который готовит-
ся с” большой тщательностью и в достаточно большом количестве в рачете на то, чтобы его хватило на несколько лет работы, а затем делится на аликвоты. К сожалению, это пожелание слишком часто оказывается невыполнимым. В не-, которых случаях одновременно не бывает в.наличии достаточного количества реактивов для приготовления большого количества исходного концентрированного раствора. В других случаях оно не может быть выполнено в связи с заменой одного стандартного препарата другим. Особенно часто такая ситуация имеет место в случае веществ, получаемых из природных источников и с трудом поддающихся очистке; характерный пример — гонадотропины человека.
4) Лиофилизация стандартов (как, например, в случае коммерческих наборов для радиоимму-нологического анализа) может приводить к ошибкам на двух этапах — при начальном распределении по флаконам и при растворении перед использованием. Оба этих этапа следует проводить количественно. Хранение стандартов в замороженном виде помо* гает избегать этих этапов, и в этом случае возможна только ошибка, связанная с конечным разливанием стандартных растворов по пробиркам.
5) Стандартные растворы белков всегда должны содер' жать белок-носитель (например, ВСА нли цельную сыворот* ку), поскольку в сильно разбавленных растворах белки нестабильны.
10.2.1.8. Ошибки в разных течкех келибревечией кривей
Точность методов связывания варьирует в зависимости от измеряемых концентраций —она максимальна в центральной части калибровочной кривой и уменьшается по мере приближения к концам (рис. 10.4). Выше уже упоминалось
Лолцея/працс/я стан&в/г/па
Рис. 10.4. Калибровочная кривая» линеаризованная путем logtt-преобразоваиия» на которой показаны доверительные интервалы для разных участков. Заметим» что иа коицах кривой доверительные интервалы значительно больше» л точность соответственно меньше.
о том, что методика проведения анализа должна быть построена таким образом, чтобы величины, представляющие наибольший интерес с биологической или клинической точки зрения, можно было измерять с наибольшей точностью (см. разд. 8.4.). Здесь просто следует еще раз повторить, что точность в большой степени зависит от методики проведения анализа, и этот факт необходимо принимать во внимание, когда идет речь о точности анализов, проводимых по разным методикам.
Представляет интерес вопрос о том, варьирует ли абсолютная точность в разных участках калибровочной кривой; в данном случае под абсолютной точностью имеется в виду разница между параллельными определениями. Нет убедительных доказательств в пользу того, что такая разница действительно существует, если не считать вариаций, которые можно объяснить различной точностью определения радиоактивности в зависимости от числа импульсов.
10.2.1.6. Ошибки определения радиоактивности
В тех методах связывания, в которых используется радиоактивная метка, важным источниксщ ошибки является неточность при определении радиоактивности. Часто, однако, совершенно неправильно считают, что ошибки определения радиоактивности являются практически единственным источником разброса результатов, тогда как в действительности в хорошо разработанном методе анализа значительно большее значение имеют технические ошибки, описанные в разд. 10.2.2. Ошибки при определении радиоактивности бывают двух типов: во-первых, те, которые связаны с работой счетчика, и, во-вторых, те, которые присущи самому процессу счета. Ошибки, связанные с плохой работой счетчика, редко имеют существенное значение, поскольку неполадки в современных электронных приборах если и наблюдаются, то сразу же легко обнаруживаются. Некоторые проблемы могут возникнуть при значительных колебаниях напряжения в сети. Ошибки, связанные с работой счетчика, могут возникать также в случае сильных различий объема анализируемых жидкостей, особенно при использовании сцинтилляци-онных счетчиков с кристаллами, имеющими форму колодца. Однако в большинстве методов анализа просчитывают фиксированный объем жидкости или осадка, в связи с чем ход счета бывает одинаков во всех пробирках. Значительно более важной причиной разброса данных является внутренняя ошибка счета, которая не зависит от конструкции и качества счетчика. Радиоактивный распад является неупорядоченным