Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 77

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 71 72 73 74 75 76 < 77 > 78 79 80 81 82 83 .. 100 >> Следующая

3) По возможности всегда следует готовить большие партии стандартных растворов (при условии, что материал стабилен при существующих условиях хранения). Поскольку пипетирование иа каждом этапе сопровождается определенной ошибкой, две серии стандартов, приготовленные в разное время из одних и тех же исходных материалов, никогда не могут быть идентичными. Частая замена стандартов неизбежно будет приводить к увеличению разброса результатов анализа (см. ниже), а также к регулярному смещению величин, характеризующих качество анализа. Практически задача состоит в том, чтобы приготовить серию стандартных растворов в таких количествах, чтобы их хватило не менее чем иа одни год. Эти партии растворов в свою очередь должны готовиться из некоторого стандарта — исходного концентрированного раствора известной концентрации, который готовит-
ся с” большой тщательностью и в достаточно большом количестве в рачете на то, чтобы его хватило на несколько лет работы, а затем делится на аликвоты. К сожалению, это пожелание слишком часто оказывается невыполнимым. В не-, которых случаях одновременно не бывает в.наличии достаточного количества реактивов для приготовления большого количества исходного концентрированного раствора. В других случаях оно не может быть выполнено в связи с заменой одного стандартного препарата другим. Особенно часто такая ситуация имеет место в случае веществ, получаемых из природных источников и с трудом поддающихся очистке; характерный пример — гонадотропины человека.
4) Лиофилизация стандартов (как, например, в случае коммерческих наборов для радиоимму-нологического анализа) может приводить к ошибкам на двух этапах — при начальном распределении по флаконам и при растворении перед использованием. Оба этих этапа следует проводить количественно. Хранение стандартов в замороженном виде помо* гает избегать этих этапов, и в этом случае возможна только ошибка, связанная с конечным разливанием стандартных растворов по пробиркам.
5) Стандартные растворы белков всегда должны содер' жать белок-носитель (например, ВСА нли цельную сыворот* ку), поскольку в сильно разбавленных растворах белки нестабильны.
10.2.1.8. Ошибки в разных течкех келибревечией кривей
Точность методов связывания варьирует в зависимости от измеряемых концентраций —она максимальна в центральной части калибровочной кривой и уменьшается по мере приближения к концам (рис. 10.4). Выше уже упоминалось
Лолцея/працс/я стан&в/г/па
Рис. 10.4. Калибровочная кривая» линеаризованная путем logtt-преобразоваиия» на которой показаны доверительные интервалы для разных участков. Заметим» что иа коицах кривой доверительные интервалы значительно больше» л точность соответственно меньше.
о том, что методика проведения анализа должна быть построена таким образом, чтобы величины, представляющие наибольший интерес с биологической или клинической точки зрения, можно было измерять с наибольшей точностью (см. разд. 8.4.). Здесь просто следует еще раз повторить, что точность в большой степени зависит от методики проведения анализа, и этот факт необходимо принимать во внимание, когда идет речь о точности анализов, проводимых по разным методикам.
Представляет интерес вопрос о том, варьирует ли абсолютная точность в разных участках калибровочной кривой; в данном случае под абсолютной точностью имеется в виду разница между параллельными определениями. Нет убедительных доказательств в пользу того, что такая разница действительно существует, если не считать вариаций, которые можно объяснить различной точностью определения радиоактивности в зависимости от числа импульсов.
10.2.1.6. Ошибки определения радиоактивности
В тех методах связывания, в которых используется радиоактивная метка, важным источниксщ ошибки является неточность при определении радиоактивности. Часто, однако, совершенно неправильно считают, что ошибки определения радиоактивности являются практически единственным источником разброса результатов, тогда как в действительности в хорошо разработанном методе анализа значительно большее значение имеют технические ошибки, описанные в разд. 10.2.2. Ошибки при определении радиоактивности бывают двух типов: во-первых, те, которые связаны с работой счетчика, и, во-вторых, те, которые присущи самому процессу счета. Ошибки, связанные с плохой работой счетчика, редко имеют существенное значение, поскольку неполадки в современных электронных приборах если и наблюдаются, то сразу же легко обнаруживаются. Некоторые проблемы могут возникнуть при значительных колебаниях напряжения в сети. Ошибки, связанные с работой счетчика, могут возникать также в случае сильных различий объема анализируемых жидкостей, особенно при использовании сцинтилляци-онных счетчиков с кристаллами, имеющими форму колодца. Однако в большинстве методов анализа просчитывают фиксированный объем жидкости или осадка, в связи с чем ход счета бывает одинаков во всех пробирках. Значительно более важной причиной разброса данных является внутренняя ошибка счета, которая не зависит от конструкции и качества счетчика. Радиоактивный распад является неупорядоченным
Предыдущая << 1 .. 71 72 73 74 75 76 < 77 > 78 79 80 81 82 83 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed