Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 67

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 61 62 63 64 65 66 < 67 > 68 69 70 71 72 73 .. 100 >> Следующая

Метод анализа, который действительно зависит от температуры, может вызывать ряд серьезных технических трудно-
стей. Содержание большого числа пробирок при фиксированной и одинаковой температуре представляет определенную сложность; так, например, если плотно заполненный пробирками штатив извлекают из холодной комнаты или из холодильника и оставляют на лабораторном столе, то сравнительно быстро может установиться значительная разница температур (более 5°С) между пробирками, находящимися с краю и в центре штатива. Это обстоятельство может иметь значение и в тех методах анализа, в которых в качестве меченого лиганда используется меченый фермент (см. разд. 3.8.2). Радиоактивность же, как известно, не зависит от температуры.
8.2.9. Увеличение числа параллельных прсб
Как уже подчеркивалось выше, чувствительность анализа очень сильно зависит от точности. В свою очередь доверительный интервал для каждой величины зависит от числа параллельных определений: с увеличением этого числа доверительный интервал будет сужаться, а чувствительность метода анализа будет повышаться. Хотя практически такой подход используется редко (поскольку он требует лишней работы), тем не менее из всех обсуждавшихся до сих пор способов это единственный способ, который при заданных условиях и при заданном наборе реагентов может давать почти неограниченное повышение чувствительности.
8.2.10. Экстракция и концентрирование
Пути повышения чувствительности с помощью экстракции и концентрирования уже обсуждались (разд. 6.1).
8.3. Способы снижения чувствительности анализа
Выше уже упоминалось о важном значении расширения интервала концентраций, охватываемых калибровочной кривой, с целью включения в него концентраций, представляющих интерес с точки зрения клиники и биологии. За очень редкими исключениями чувствительность методов связывания, и особенно радиоиммунологического метода, в оптимальных условиях может быть сделана очень высокой, значительно превышающей чувствительность, необходимую для ежедневных стандартных анализов. Это их преимущество позволяет расширить интервал концентраций анализируемых рас-творов за счет снижения чувствительности.
ПЛЧ, не/0,1 мл
Рис. 8.6. Понижение чувствительности радиоиммунологического анализа плацентарного лактогеиа человека. Повышение концентрации антитела (концентрация дана как величина* обратная титру используемых образцов) вызывает сдвиг калибровочной
кривой вправо.
Основной способ уменьшения чувствительности состоит в повышении концентрации связывающего агента, в результате чего происходит постепенный сдвиг калибровочной кривой в сторону более высоких концентраций немеченого лиганда (рис. 8.6). Увеличение концентрации связывающего агента влечет за собой ряд изменений в условиях проведения анализа, которые можно суммировать следующим образом.
1) Концентрация меченого лиганда. По мере повышения концентрации связывающего агента количество меченого лиганда также может повышаться (ситуация, обратная той, при которой для повышения чувствительности метода подбирают лимитирующую концентрацию меченого лиганда). Увеличение количества меченого лиганда обладает двумя важными преимуществами. Во-первых, при той же удельной радиоактивности используемой метки можно уменьшить необходимое время счета. Во-вторых, удается снизить удельную радиоактивность меченого лиганда, уменьшив тем самым возможность его повреждения и повысив стабильность. В методе анализа, в котором сильно снижена чувствительность, в таком, например, как показан на рис. 8.6, сочетаются оба преимущества, а именно без всякого ущерба для формы или положения калибровочной кривой используется меченый лиганд с низкой удельной радиоактивностью в таком количестве, которого вполне достаточно, чтобы получить требуемый уровень счета менее чем за 10 с.
2) Нулевой стандарт и форма кривой. Использование большого количества связывающего агента приводит к повы-шению уровня связывания в нулевом стандарте и в связи с этим к увеличению крутизны кривой и, следовательно, к повышению точности определения количества анализируемых веществ.
3) Время инкубации. Использование всех реагентов в высоких концентрациях способствует очень быстрому наступлению равновесия. В экстремальном случае, который приведен на рис. 8.6, равновесие при высоких концентрациях антисыворотки устанавливается почти мгновенно, и поэтому вслед за связывающим агентом можно сразу же добавлять реагент, применяемый для разделения.
4) Объем образца. Объем образца может быть сведен до минимума, при котором еще сохраняется возможность точно* го и воспроизводимого пипетирования (практически около 50 мкл). Маленький объем образца, взятого для анализа, об-ладает двумя достоинствами: во-первых, образец при этом, значительно разбавляется инкубационной смесью, вследствие чего устраняются неспецифические эффекты, и, во-вторых, от больного берется лишь небольшое количество крови. Последнее обстоятельство имеет особенно важное значение в настоящее время, когда проведение нескольких анализов с одним и тем же образцом становится скорее правилом, чем исключением. Еще одно достоинство метода анализа, в котором снижена чувствительность, состоит в том, что его использование избавляет от необходимости проводить предварительное разбавление образца; этот этап неизбежно является источником ошибок, снижающих точность конечного результата.
Предыдущая << 1 .. 61 62 63 64 65 66 < 67 > 68 69 70 71 72 73 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed