Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 5

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 < 5 > 6 7 8 9 10 11 .. 100 >> Следующая

под силу только тем лабораториям, которые располагали сложным и дорогостоящим оборудованием. В настоящее время этот метод применяется почти повсеместно, и его простота и эффективность в значительной мере стимулировали развитие новых методов этого типа.
1.4. Основные принципы методов связывания
Основные принципы методов связывания довольно просты. Тем не менее некоторые исследователи, известные своими работами в этой области, признавались, что, приступая к освоению метода, они не очень хорошо понимали принципы, лежащие в его основе. Начинающему исследователю вряд ли помогает тот факт, что почти каждый автор, публикующий работу с использованием метода связывания, излагает принципы этого метода по-своему и при этом нередко критикует точку зрения других авторов, считая ее слишком упрощенной и даже ошибочной. Многие из аргументов носят, однако, чисто семантический характер, поскольку все авторы рассматривают одну и ту же систему, исходя из одних и тех же положений, но приходят к интерпретации принципа метода разными путями.
Для простоты и большей доступности предположим, что мы обсуждаем радиоиммунологический метод, т. е. метод, в котором в качестве связывающего агента используются антитела, а в качестве лиганда — антиген. Однако в основе любого другого метода, подходящего под категорию методов связывания, лежат те же принципы. Принцип радиоиммунологического метода в схематической форме представлен'-иа рис. 1.1, на котором показано связывание антигена с антителом в присутствии различных суммарных количеств антигена. Распределение антигена между связанной и свободной фазами находится в прямой зависимости от общего количества присутствующего антигена, что позволяет определять его количество.
Для того чтобы лучше понять принцип метода связывания, обратимся к представлению об обратимых реакциях, таких, например, как реакция между антигеном и антителом с образованием комплекса антиген — антитело:
ft,
Аг + Ат 4=*= АгАт. (1.1)
кг
В этом уравнении через k\ обозначена константа скорости прямой реакции (связывание антигена с антителом с образованием комплекса), а через k% — константа скорости обратной реакции (диссоциация комплекса антиген — антитело). Следует отметить, что k\ и k2 являются константами, т. е. показывают, какая доля молекул вступает в реакцию в единицу
О'
Антитело
У, J
Антиген
О
Антитело Антиген
Рис. 1.1. Основной принцип метода связывания, рассмотренный на примере радио-иммунологического анализа. Допустим, что антиген и антитело в определенных количествах (вверху) взаимодействуют друг с другом, образуя комплекс антвгев - антитело; в состоянии рзвновесия в системе будет содержзться комплекс антиген — антитело (перекрывзющзяся зовз В) и некоторое количество свободного антитела и свободного аитигеиз (зонз F). Допустим теперь, что количество антитела остается прежним. а количество антигенз увеличивается (внизу). Тогдз в состоянии равновесия количество комнлексз зитнген — антитело (зонз В) тоже увеличится, но количество свободного антигена (зона F) увеличится в еще большей степени, и отношение связанного антигена к свободному тзким образом уыеныпится.
времени. Абсолютная скорость, т. е. общее число молекул, реагирующих в единицу времени, будет, очевидно, зависеть от концентрации молекул. Таким образом, когда после добавления антигена и антитела начинается процесс связывания, скорость прямой реакции будет высокой, а скорость обратной реакции соответственно — низкой.
Аг + Ат АгАт. (1.2)
В процессе реакции концентрации свободных Аг и Ат будут снижаться, и в результате скорость прямой реакции будет падать. В то же время концентрация комплекса АгАт и скорость обратной реакции будут увеличиваться. В конечном счете наступит такое состояние, когда количество свободных молекул Аг и Ат, реагирующих в единицу времени, с образованием комплекса АгАт, будет равно количеству молекул комплекса АгАт, которые за это время диссоциируют:
Аг + Ат АгАт. (1.3)
В этом состоянии равновесия дальнейшего изменения концентрации молекул в обеих частях уравнения происходить не будет. В большинстве радиоиммунологических методов (хотя и не во всех) до установления равновесия проходит достаточно много времени, в связи с чем в дальнейшем мы будем в наших рассуждениях пользоваться уравнением (1.3).
Точные значения равновесных концентраций зависят от энергии связывания связывающего агента с лигандом. В термодинамике эта энергия, обозначаема^ ДО, равна изменению
свободной энергии всей системы. Указанное состояние можно описать, исходя из закона действующих масс, согласно которому в состоянии равновесия отношение произведений концен* траций в обеих частях уравнения является постоянной величиной, обозначаемой обычно через К:
[АгАт] ...у
[Аг] [Ат] I1*4'
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 < 5 > 6 7 8 9 10 11 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed